【摘 要】
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目的 研究载体融合肽段对人工重组多表位蛋白M.RCAg-1构象、免疫原性及体外保护性的影响.方法 将人工多表位抗原M.RCAg-1基因通过不同的酶切位点克隆到原核表达载体pDS-ex
【机 构】
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北京生物制品研究所第四研究室,北京协和医学院基础学院病原生物学系
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目的 研究载体融合肽段对人工重组多表位蛋白M.RCAg-1构象、免疫原性及体外保护性的影响.方法 将人工多表位抗原M.RCAg-1基因通过不同的酶切位点克隆到原核表达载体pDS-ex上,从而获得带有不同载体融合标签或没有标签的蛋白,表达产物经纯化得到P312-1、P312-2、P312-3这3种多表位蛋白,利用生物信息学和色谱技术对制备的3种蛋白的二级及三级结构进行了分析,并将这3种纯度大于95％的重组蛋白与弗氏佐剂乳化后分别免疫接种小鼠和新西兰白兔,免疫后血清按常规进行ELISA间接法检测抗体滴度,采用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测分泌细胞因子的特异性淋巴细胞克隆数,同时进行了间接免疫荧光分析(IFA)以及对体外培养的恶性疟原虫的生长抑制试验(GLA).结果 P312-1、P312-2、P312-3这3种多表位蛋白在动物模型体内诱导的抗体滴度水平并无差异(P＞0.05),但蛋白免疫小鼠后却诱导了不同类型的T细胞反应,而且3种蛋白免疫血清IgG体外生长抑制率出现明显差异(分别为93.9％、14.7％、54.3％).利用生物信息学和色谱技术分析,发现从不同表达载体制备的重组蛋白在二级和三级结构上出现极大差异,预测蛋白质分子的空间构象发生了改变,而且一些表位在分子中的位置也有明显的改变.结论 不同的载体肽融合表达对多表位蛋白M.RCAg-1结构及免疫活性的影响会产生不同的作用,直接影响多表位蛋白的构象,进而会增强或抑制多表位蛋白的免疫效应.
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