论文部分内容阅读
利用聚合酶链反应（PCR）技术，直接从正常人胎肝染色体DNA库中分离克隆了中国人粒细胞集落刺激因子（G-CSF）外显子，全长537bp，它包括除信号肽氨基酸外的所有编码区，为了使克隆的G-CSF外显子在大肠杆菌中高效表达，对其5′端进行了修饰，去除第1个编码Thr的密码子，在不改变氨基酸的前提下，变换为AT丰富的密码子；并将某些密码子换成大肠杆菌喜用的密码子。对于每段目的DNA所进行的2次独立的PCR反应所获得的产物分别进行了核苷酸序列测定，结果完全一致，证明所克隆的G-CSF外显子的序列是可靠的，与国外发表的G-CSF外显子序列相比，未发现变异。将上述人G-CSF外显子基因插入pBV220表达载体，构建了pBV220/G-CSF质粒，将其转化入DH5α菌，SDS-PAGE表明其表达量约占菌体总蛋白量的20%，用依赖性细胞系NFS-60进行测定，活性为5×107IU/L。