【目的】探讨一步法破膜剂(Per Fix-nc)进行胞内染色在流式细胞术临床检测Th1和Th2细胞中的应用。【方法】取10例健康儿童(HV)外周全血刺激培养,分别采用Per Fix-nc与两步法破膜剂固定破膜染色,用流式细胞术检测CD3+CD8-细胞中的Th1%和Th2%,比较两种破膜剂检测Th1和Th2细胞有无差异,并进行方法一致性检验。并随机选取一例HV样本进行重复性试验。用10例儿童再生障碍性贫血(AA)患者的Th1%和Th2%对实验条件进行验证。【结果】Per Fixnc和两步法破膜剂相比,HV中检测出的Th1细胞百分比分别为20.10(15.59-24.78)%和19.57(16.73-25.26)%(P>0.05),其相关系数r=0.777(P<0.01);Th2细胞百分比分别为1.83(1.52-2.38)%和1.87(1.43-2.42)%(P>0.05),其相关系数r=0.875(P<0.01)。重复性试验中,样本的Th1和Th2细胞百分比均值分别为(17.88±1.75)%、(1.47±0.13)%,CV分别为9.8%、8.8%。儿童AA患者的Th1和Th2细胞分别为(32.3±6.06)%、(1.55±0.34)%,Th1和Th2细胞较儿童HV组有非常显著性差异(P<0.01)。【结论】一步法(Per Fix-nc)与两步法破膜剂之间有较好的相关性,在简化破膜操作流程的同时,能达到较两步法更好的细胞分群,为临床上Th1和Th2细胞的日常检测和进一步研究提供了较好的实验条件。