【摘 要】
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目的在A型肉毒毒素轻链多肽抑制剂CPI-1引入穿膜序列,提高其抑制活性。方法基于CPI-1序列,在N端或C端增加穿膜序列Angiopep-2（Ang）或多聚精氨酸（R8）,固相合成线性肽,空气氧化折叠
【基金项目】
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国家重点研发计划资助项目(2017YFC1200905)
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目的在A型肉毒毒素轻链多肽抑制剂CPI-1引入穿膜序列,提高其抑制活性。方法基于CPI-1序列,在N端或C端增加穿膜序列Angiopep-2（Ang）或多聚精氨酸（R8）,固相合成线性肽,空气氧化折叠形成目标产物,经RP-HPLC纯化得纯肽。表达A型肉毒毒素轻链截短体LC424,合成含荧光基团与淬灭基团的肉毒毒素轻链水解底物SNAPtide,采用荧光共振能量转移法（FRET）测定各多肽对肉毒毒素轻链的抑制活性,小鼠攻毒测定各肽体内活性。结果将Ang连接于CPI-1的N端或C端后,Ang-CPI-1、Ang-GG-CPI-1、CPI-1-Ang以及CPI-1-GG-Ang的IC50值分别为148. 2、251. 9、88. 1、90. 9 nmol/L,相比于CPI-1(IC50=411. 9 nmol/L)活性提升1～3倍;多聚精氨酸接入CPI-1的N端后导致抑制活性丧失。结论在CPI-1的N端和C端增加Ang肽能提升其对A型肉毒毒素轻链抑制活性,但不能增加体内活性。
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