【摘 要】
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目的 探究青藤碱调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)通路抑制BV-2小胶质细胞焦亡及炎症的机制.方法 以氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)模型诱导BV-2细胞焦亡模型,采用CCK-8法检测不同浓度(0、10、20、50、100μmol/L)的青藤碱干预BV-2小胶质细胞24h后的细胞活性,筛选药物浓度.将BV-2细胞分为正常组、OGD/R组和OGD/R+青藤碱组(20μmol/L)进行研究.使用微量酶标法测BV-2小胶质细胞乳酸脱氢酶(LDH)
【机 构】
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浙江省台州市立医院急诊科,台州 318000
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目的 探究青藤碱调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)通路抑制BV-2小胶质细胞焦亡及炎症的机制.方法 以氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)模型诱导BV-2细胞焦亡模型,采用CCK-8法检测不同浓度(0、10、20、50、100μmol/L)的青藤碱干预BV-2小胶质细胞24h后的细胞活性,筛选药物浓度.将BV-2细胞分为正常组、OGD/R组和OGD/R+青藤碱组(20μmol/L)进行研究.使用微量酶标法测BV-2小胶质细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性.采用赫斯特(Hoechst)/碘化丙啶(PI)细胞染色法检测BV-2细胞中PI阳性细胞数.采用RT-PCR和Western blot方法检测青藤碱对BV-2小胶质细胞硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、NLRP3、caspase-1、白细胞介素(IL)-1β和IL-18的mRNA和蛋白表达水平的影响.结果 10、20μmol/L青藤碱干预24h后,OGD/R诱导的BV-2小胶质细胞活性较对照组无显著差异[(97.69±0.51)％、(96.03±1.13)％比(100.00±0.00)％,P均>0.05)],50、100μmol/L青藤碱干预24h后,OGD诱导的BV-2小胶质细胞活性较对照组显著降低[(78.92±3.02)％、(64.12±4.55)％比(100.00±0.00)％,P均<0.05].与正常组比较,OGD/R组BV-2小胶质细胞LDH相对释放量明显上升[(2.23±0.19)比(1.00±0.00),P<0.05],PI活性细胞比例明显升高[(46.28±4.02)％比(3.52±0.31)％,P<0.05],TXNIP、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA[TXNIP:(1.58±0.20)比(0.69±0.08),P<0.05;NL-RP3:(2.32±0.18)比(0.88±0.09),P<0.05;caspase-1:(1.61±0.11)比(0.77±0.15),P<0.05;IL-1β:(3.17±0.43)比(1.03±0.09),P<0.05;IL-18:(1.82±0.22)比(0.81±0.13),P<0.05]和蛋白表达水平明显上调[TXNIP:(1.26±0.13)比(0.72±0.09),P<0.05;NLRP3:(0.43±0.04)比(0.16±0.04),P<0.05;cas-pase-1:(1.30±0.09)比(0.58±0.07),P<0.05;IL-1β:(1.21±0.11)比(0.39±0.06),P<0.05;IL-18:(0.54±0.07)比(0.23±0.06),P<0.05].与OGD/R组比较,OGD/R+青藤碱组BV-2细胞LDH相对释放量明显下降[(1.28±0.09)比(2.23±0.19),P<0.05],PI活性细胞比例显著减少[(23.08±3.46)％比(46.28±4.02)％,P<0.05],TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1βmRNA[TXNIP:(0.95±0.11)比(1.58±0.20),P<0.05;NLRP3:(1.26±0.12)比(2.32±0.18),P<0.05;caspase-1:(0.95±0.05)比(1.61±0.11),P<0.05;IL-1β:(1.55±0.18)比(3.17±0.43),P<0.05]和蛋白表达水平显著下降[TXNIP:(0.78±0.04)比(1.26±0.13),P<0.05;NLRP3:(0.26±0.03)比(0.43±0.04),P<0.05;caspase-1:(0.71±0.05)比(1.30±0.09),P<0.05;IL-1β:(0.54±0.03)比(1.21±0.11),P<0.05],IL-18蛋白水平下降[(0.34±0.08)比(0.54±0.07),P<0.05].结论 青藤碱可能通过下调NLRP3/caspase-1通路磷酸化水平,抑制BV-2小胶质细胞焦亡及炎症反应.
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