观察1.0 μmol/L亚砷酸钠(NaAsO2)长期作用于永生化人皮肤角质形成细胞(HaCaT)时,细胞凋亡及凋亡相关蛋白的动态变化。
方法用1.0 μmol/L NaAsO2长期作用HaCaT细胞成功建立恶性转化模型,收集细胞恶性转化模型建立过程中0、1、7、14、21、28、35代细胞。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白,包括活化的半胱氨酸蛋白酶3、8(cleaved-caspase-3、8)、转录因子C/EBP的同源蛋白(Chop)、淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)。
结果随着染砷代数的增加,细胞凋亡率呈明显的下降趋势,各代数间比较差异有统计学意义(F= 26.770,P < 0.05),其中染砷第7、14、21、28、35代细胞的凋亡率(0.307 ± 0.049、0.213 ± 0.055、0.163 ± 0.057、0.147 ± 0.035、0.053 ± 0.012)低于对照组0代(0.393 ± 0.021,P均< 0.05)。染砷组促凋亡的cleaved-caspase-3、Chop、Bax蛋白和抗凋亡的Bcl-2蛋白表达各代间比较,差异有统计学意义(cleaved-caspase-3:1.000 ± 0.000、1.030 ± 0.027、1.104 ± 0.069、1.016 ± 0.087、0.838 ± 0.075、0.753 ± 0.082、0.677 ± 0.073;Chop:1.000 ± 0.000、1.059 ± 0.018、0.934 ± 0.095、0.976 ± 0.216、0.793 ± 0.136、0.651 ± 0.042、0.564 ± 0.056;Bax:1.000 ± 0.000、1.069 ± 0.037、1.028 ± 0.042、0.954 ± 0.118、0.641 ± 0.135、0.531 ± 0.132、0.429 ± 0.085;Bcl-2:1.000 ± 0.000、1.072 ± 0.023、1.249 ± 0.134、1.334 ± 0.143、1.633 ± 0.221、1.507 ± 0.152、1.461 ± 0.145,F= 7.730、7.355、27.802、12.438,P均< 0.05),且21代及以后与对照组0代(1.000 ± 0.000)和同代对照组(1.000 ± 0.000)比较,差异有统计学意义(P均< 0.05);而cleaved-caspase-8蛋白各代间比较,差异无统计学意义(F= 0.832,P > 0.05)。
结论低剂量NaAsO2可能通过作用于线粒体和内质网凋亡通路抑制HaCaT细胞的正常凋亡而使其发生恶性转化。