【摘 要】
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目的研究周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinase，CDK)抑制剂Roscovitine抑制HBV复制的分子机制。方法首先通过构建SAMHD1蛋白dNTPase活性位点及T592磷酸化位点的突变体研究磷酸化负调控抑制作用；接着在肝癌细胞Huh7.0细胞中加入不同浓度的Roscovitine，通过MTT法检测了Roscovitine化合物对细胞毒性的影响；转染HBV复制质
【机 构】
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目的研究周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinase，CDK)抑制剂Roscovitine抑制HBV复制的分子机制。
方法首先通过构建SAMHD1蛋白dNTPase活性位点及T592磷酸化位点的突变体研究磷酸化负调控抑制作用；接着在肝癌细胞Huh7.0细胞中加入不同浓度的Roscovitine，通过MTT法检测了Roscovitine化合物对细胞毒性的影响；转染HBV复制质粒后，提取病毒核心颗粒DNA，通过Southern blot检测了Roscovitine对HBV的抑制作用，Western blot检测SAMHD1蛋白的磷酸化水平。
结果在增殖细胞中，SAMHD1蛋白dNTPase活性突变体D207N丧失了对HBV的抑制作用；T592位点的去磷酸化增强了SAMHD1对HBV的抑制作用；Roscovitine的半数毒性浓度(TC50)为11.20 μmol/L，Roscovitine可以显著抑制SAMHD1的磷酸化和HBV的复制。
结论在增殖细胞中，SAMHD1蛋白T592位点的去磷酸化增强了其对HBV的抑制作用，Roscovitine可以通过抑制SAMHD1的磷酸化后抑制HBV的复制。
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