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绵羊透明质酸酶-2的真核表达及鉴定

来源 :中国畜牧兽医 | 被引量 : 0次 | 上传用户：q3177848

【摘 要】

：

为了构建绵羊透明质酸酶-2（hyaluronidase 2,Hyal-2）的真核表达载体并实现其在牛乳腺上皮细胞内瞬时表达,根据GenBank中绵羊Hyal-2基因序列（登录号：NM_001009754）设计2对引物,并分

【作 者】

：

张月梅 么宏强 斯日古楞 马学恩 

【机 构】

：

内蒙古农业大学兽医学院,农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室

【出 处】

：

中国畜牧兽医

【发表日期】

：

2012年11期

【关键词】

：

透明质酸酶-2 真核表达 RT-PCR WESTERN BLOTTING hyaluronidase 2  eukaryotic expression  RT- 

【基金项目】

：

国家自然科学基金资助课题（31101788）

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为了构建绵羊透明质酸酶-2（hyaluronidase 2,Hyal-2）的真核表达载体并实现其在牛乳腺上皮细胞内瞬时表达,根据GenBank中绵羊Hyal-2基因序列（登录号：NM_001009754）设计2对引物,并分别在前段上游和后段下游引物5′端引入HindⅢ酶切位点和BamHⅠ酶切位点,同时在上游引物酶切位点后加入KOZAK序列,进行分段PCR扩增。以扩增的两段产物为共同模板运用重叠（overlapping）PCR技术扩增Hyal-2基因全长。通过连接反应将双酶切并纯化后的目的片段克隆于真核表达

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