评价冷缺血期氢预处理对大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)缺氧复氧时核因子E2相关因子2(Nrf2)活性的影响。
方法雄性清洁级SD大鼠，2～3周龄，使用组织块贴壁法，提取PMVECs，采用随机数字表法分为4组(n＝25)：对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)、氧气组(O组)和氢气组(H组)。经95%氧气-5%二氧化碳预平衡的低钾右旋糖酐液(LPD)4 ℃孵育4 h，模拟冷缺血期；LPD替换经95%氧气- 5%二氧化碳预平衡的LPD，室温孵育1 h，模拟肺移植期；37 ℃ M199完全培养液迅速替换LPD，在40%氧气-5%二氧化碳-55%氮气混合气体中孵育，模拟再灌注期。O组和H组于冷缺血期密闭培养箱分别通入40%氧气-60%氮气、3%氢气-40%氧气-57%氮气，每20 min置换1次。4 h后收集细胞培养液，采用ELISA法检测IL-6、IL-10、TNF-α浓度，采用硫代巴比妥酸法测定MDA浓度；提取细胞质和细胞核蛋白，采用Western blot方法测定Nrf2表达水平；分别采用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡率。
结果与C组比较，H/R组IL-6、TNF-α和MDA水平升高，IL-10水平降低，细胞凋亡率升高，细胞核Nrf2表达上调(P<0.05)；与H/R组比较，O组和H组IL-6、TNF-α和MDA水平降低，IL-10水平升高，细胞凋亡率降低，细胞质Nrf2表达下调，H组细胞核Nrf2表达上调(P<0.05)，O组细胞核Nrf2表达差异无统计学意义(P>0.05)；与O组比较，H组IL-6、TNF-α和MDA水平降低，IL-10水平升高，细胞凋亡率降低，细胞核Nrf2表达上调，细胞质Nrf2表达下调(P<0.05)。
结论冷缺血期氢预处理减轻大鼠PMVECs缺氧复氧损伤的机制与激活Nrf2，从而抑制氧化应激有关。