探讨不同浓度腐胺对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移、凋亡的影响。
方法常规培养HUVEC,取第3~5代细胞进行以下实验。(1)按随机数字表法(分组方法下同)将细胞分为500、1 000、5 000 μg/mL腐胺组,每组3孔,分别以含相应浓度腐胺的完全培养液培养24 h后,采用倒置光学显微镜观察细胞形态。(2)将细胞分为0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、500.0、1 000.0 μg/mL腐胺组及对照组,每组4孔。各腐胺组细胞采用含相应浓度腐胺的完全培养液、对照组采用不含腐胺的完全培养液培养24 h后,采用比色法测定细胞增殖活性,结果以吸光度值表示。(3)同实验(2)将细胞分组(每组1孔)及培养后,Transwell迁移实验测定细胞迁移能力。(4)同实验(2)将细胞分组(每组1瓶)及培养后,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率。对数据进行单因素方差分析、Kruskal-Wallis检验、Dunnett检验。
结果(1)培养24 h后,500 μg/mL腐胺组细胞贴壁良好,形态无明显改变;1 000 μg/mL腐胺组细胞贴壁减少,细胞变小、变圆;5 000 μg/mL腐胺组细胞未贴壁、呈碎片状。(2)0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、500.0、1 000.0 μg/mL腐胺组及对照组细胞增殖活性分别为0.588±0.055、0.857±0.031、0.707±0.031、0.662±0.023、0.450±0.019、0.415±0.014、0.359±0.020、0.204±0.030、0.447±0.021,组间总体比较差异明显(χ2=6.86,P=0.009)。0.5、1.0、5.0、10.0 μg/mL腐胺组细胞增殖活性较对照组升高(P<0.05或P<0.01),500.0、1 000.0 μg/mL腐胺组细胞增殖活性较对照组降低(P值均小于0.01),50.0、100.0 μg/mL腐胺组细胞增殖活性与对照组相近(P值均大于0.05)。(3)各腐胺组及对照组迁移细胞数组间总体比较差异明显(F=138.662,P<0.001)。1.0、5.0、10.0 μg/mL腐胺组迁移细胞数多于对照组(P值均小于0.01),500.0、1 000.0 μg/mL腐胺组迁移细胞数少于对照组(P值均小于0.01),0.5、50.0、100.0 μg/mL腐胺组迁移细胞数与对照组相近(P值均大于0.05)。(4)各腐胺组及对照组细胞凋亡率组间总体比较差异明显(χ2=3.971,P=0.046)。0.5、1.0、5.0、10.0 μg/mL腐胺组细胞凋亡率较对照组降低(P值均小于0.05),500.0、1 000.0 μg/mL腐胺组细胞凋亡率较对照组升高(P值均小于0.01),50.0、100.0 μg/mL腐胺组细胞凋亡率与对照组相近(P值均大于0.05)。
结论低微浓度的腐胺能显著促进HUVEC增殖与迁移;而较高浓度的腐胺能显著抑制HUVEC增殖与迁移,并促进细胞凋亡。