聚酰胺-胺型树枝状聚合物介导人凝血因子Ⅷ的体外高效稳定表达

来源 :中华血液学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jackywang1980
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目的应用纳米材料聚酰胺-胺型(PAMAM)树枝状聚合物/逆病毒基础的质粒载体复合体,在表达水平、持续时间和细胞毒性三方面进行血友病A基因治疗的体外研究.方法 PAMAM树枝状聚合物与含B区缺失(760 aa~1 639 aa)人FⅧ cDNA(FⅧBD cDNA)的以逆病毒为框架的重组表达质粒载体pLNC-FⅧBD形成复合体后,转染NIH3T3细胞系,于转染后第2,5,10,15,30 d留取细胞培养上清,分别采用一期法和ELISA法检测其中人FⅧ的凝血活性(FⅧ∶C)和抗原含量(FⅧ∶Ag),并应用RT-PCR方法检测细胞中FⅧBD cDNA的转录,以细胞生长抑制率来表示PAMAM的细胞毒性.结果 PAMAM载体介导的人FⅧ的体外表达可持续30 d,24 h内每ml细胞上清中106细胞表达FⅧ∶C平均为0.929 U,FⅧ∶Ag平均为0.188 μg,期间FⅧ表达未见降低;PAMAM的细胞生长抑制率为5.32%.结论 PAMAM能够有效介导逆病毒基础的质粒载体pLNC-FⅧBD转染靶细胞,并维持高效稳定表达,且PAMAM的细胞毒性较低.

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