【摘 要】
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目的:研究半乳糖凝集素-3结合蛋白(LGALS3BP)在IFN-γ介导的抗HBV中的作用.方法:采用qRT-PCR及Western Blot分别检测HepG2细胞瞬转过表达质粒及干扰质粒后LGALS3BP转录水平和翻译水平的变化及检测IFN-γ对HepG2细胞内源性LGALS3BP转录水平和翻译水平的影响;采用CCK-8评价LGALS3BP表达量的变化对HepG2细胞增殖的影响及确定IFN-γ处理HepG2和HepG2.215的最适浓度;采用ELISA检测当LGALSEBP表达量发生变化时,IFN-γ刺激
【机 构】
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湖北工业大学生物工程与食品学院中德生物医学中心工业微生物湖北省重点实验室国家外专局/教育部细胞调控与分子药物“111”引智基地 湖北武汉430068
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目的:研究半乳糖凝集素-3结合蛋白(LGALS3BP)在IFN-γ介导的抗HBV中的作用.方法:采用qRT-PCR及Western Blot分别检测HepG2细胞瞬转过表达质粒及干扰质粒后LGALS3BP转录水平和翻译水平的变化及检测IFN-γ对HepG2细胞内源性LGALS3BP转录水平和翻译水平的影响;采用CCK-8评价LGALS3BP表达量的变化对HepG2细胞增殖的影响及确定IFN-γ处理HepG2和HepG2.215的最适浓度;采用ELISA检测当LGALSEBP表达量发生变化时,IFN-γ刺激后对细胞外分泌的HBsAg和HBeAg的影响;采用q-PCR和RT-PCR分别检测细胞内HBV核衣壳中DNA和细胞内HBV RNA水平.结果:40 ng/mL的IFN-γ处理HepG2细胞48小时,LGALS3BP mRNA表达量与对照组相比提高2.87倍,但LGALS3BP表达量的变化对细胞增殖无显著作用;当过表达LGALS3BP时,在IFN-γ介导的抗HBV过程中,与对照组相比,HepG2.215细胞分泌的HBsAg、HBeAg以及细胞内HBV DNA和RNA的相对下降幅度分别为46％、67％、59％、49％;与对照组相比,转染pCH9-3091的HepG2细胞分泌的HBsAg、HBeAg以及细胞内HBV DNA和RNA的相对下降幅度分别为67％、53％、60％、29％;而当干扰LGALS3BP时,在IFN-γ介导的抗HBV过程中,与对照组相比,HepG2.215细胞分泌的HBsAg、HBeAg以及细胞内HBV DNA和RNA的相对上升幅度分别为46％、67％、59％、49％;与对照组相比,转染pCH9-3091的HepG2细胞分泌的HBsAg、HBeAg以及细胞内HBV DNA和RNA的相对上升幅度分别为67％、77％、67％、45％.结论:LGALS3BP作为正向调节因子参与IFN-γ介导的抗HBV过程.
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