【摘 要】
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为了从分子水平上揭示小立碗藓PpFLS2基因的结构特点以及是否参与了由灰霉菌病原体相关分子模式（PAMP）引起的小立碗藓防御反应，对PpFLS2基因做了生物信息学分析并构建PpFLS2-PTN182敲除载体，为研究其功能和早期登陆植物防卫的进化提供依据。利用生物信息学手段，对PpFLS2基因序列和结构进行了分析和预测。提取小立碗藓DNA，PCR扩增PpFLS2基因的上下游片段，使用Sal I、Ec
【基金项目】
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国家自然科学基金（31260426; 31560508; 32060611）资助；
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为了从分子水平上揭示小立碗藓PpFLS2基因的结构特点以及是否参与了由灰霉菌病原体相关分子模式（PAMP）引起的小立碗藓防御反应，对PpFLS2基因做了生物信息学分析并构建PpFLS2-PTN182敲除载体，为研究其功能和早期登陆植物防卫的进化提供依据。利用生物信息学手段，对PpFLS2基因序列和结构进行了分析和预测。提取小立碗藓DNA，PCR扩增PpFLS2基因的上下游片段，使用Sal I、EcoR V，Sph I、BamH I酶分别酶切上下游目的片段，同时酶切PTN182，经T4-DNA酶连接，转入大肠杆菌感受态，筛选出阳性克隆，经酶切验证并测序，获得了完整的PpFLS2-PTN182敲除载体。生物信息学分析显示，PpFLS2的DNA序列全长2541bp，有一个外显子，一个开放阅读框；该蛋白质属于不稳定、亲水性蛋白；蛋白的二级结构存在39.3%的α-螺旋，2.63%的β-转角，11.86%的β-折叠，46.21%的无规则卷曲；系统进化分析结果表明，可能小立碗藓的PpFLS2同源基因在进化过程中发生了功能的较大分化。经PCR检测、酶切验证和测序分析，表明PpFLS2-PTN182敲除载体构建成功。通过生物信息学分析和敲除载体构建成功，研究结果可为后续对PpFLS2的功能研究奠定基础。
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