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摘 要：目的：通过比较得到较理想的果蔬汁样品前处理方法，采用此方法对能力验证样品进行处理，精确测定能力验证样品中的毒死蜱含量。方法：果蔬汁样品经过乙腈、丙酮、二氯甲烷及乙酸乙酯等提取，颜色较深的提取液经过石墨化炭黑净化，再用无水硫酸镁或无水硫酸钠进行脱水处理，以NPD、FPD与质谱3种检测器进行检测，外标法定量。结果：岛津的NPD检测器测定值较指定值偏低;安捷伦的FPD检测器测定值较指定值偏高;岛津GPC-GC-MS的测定值最接近指定值。以上测定结果经加标回收与质控校正后均较接近真实值，且RSD均<0.1%。结论：采用以上方法对能力验证样品中毒死蜱残留进行测定，能力验证试验取得了满意的结果，以上说明实验方法有着较好的准确性和实用性，适合果汁中毒死蜱农药残留的检测。
关键词：果蔬汁;毒死蜱;能力验证
我国果蔬资源日益丰富多样[1]，果蔬汁越来越频繁的出现在人们的日常生活中。在过去的50年里，农业发展的一个关键组成部分就是使用杀虫剂来提高果蔬产量。婴幼儿食品中用到了一定比例的果蔬。在过去的10年，毒死蜱一直排在婴幼儿食品中超标杀虫剂的首位。因此，建立快速、有效、安全的样品预处理和检测方法来检测、鉴定和量化毒死蜱农残成为当前研究和探索的热点[2]。
目前，国外的研究大都集中在采用QuEChERS前处理方法结合反相高效液相色谱荧光检测器对水果蔬菜样品中的毒死蜱进行测定，或是使用固相萃取技术与便携式拉曼分析仪相结合的检测方法，以及使用纳米纤维固相萃取法对水和果汁样品进行前处理后用气相色谱测定毒死蜱的含量[3-4]。国内对水果和蔬菜样品中农药多残留的检测方法研究较多，但对于果蔬汁中的农药多残留检测方法却研究较少[5-9]。已有的方法陈旧且耗时较长。而国家标准中关于农药残留的分析检测方法也尚未细化到果蔬汁，所以目前还缺少一些安全、高效且准确的方法作为日常监测果蔬汁中农残的参考。因此，为了有效控制毒死蜱农药残留安全问题，进一步提高果蔬汁的质量安全，实验室通过对试验条件的比对和优化，筛选得到了可快速准确测定果蔬汁中毒死蜱残留量的分析方法，并将筛选得到的方法应用于能力验证，取得了满意的考核结果。为果汁中农药残留分析以及实验室面临的考核工作提供更多借鉴和参考。
1 材料与方法
1.1 主要仪器
Agilent7890A气相色谱仪（FPD检测器，美国安捷伦科技有限公司）;岛津GC-2014气相色谱仪（NPD检测器，岛津国际贸易有限公司）;凝胶渗透色谱-气相色谱-四级杆质谱联用仪（岛津国际贸易有限公司）;氮吹仪OA-HEAT Heating System（Organomation）;离心机Thermo Electron LED GmbH D-37520 Osterode（ThermoFisher SCIENTIFIC）;邦洁BG-08C超声波仪（广州邦洁电子产品有限公司）;其林贝尔VORTEX/KB3涡旋均质器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）。
1.2 试剂及标准溶液
丙酮（色谱纯，霍尼韦尔（中国）有限公司）;乙腈（色谱纯，西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司）;无水硫酸镁（分析纯，使用前于600 ℃烘烤4 h）;氯化钠（分析纯，使用前于120 ℃烘烤4 h）;无水硫酸钠（分析纯，使用前于600 ℃烘烤4 h）;二氯甲烷（色谱纯，赛默飞世尔科技（中国）有限公司）;正己烷（色谱纯，韩国德山公司）;毒死蜱（GSB05-1869-2016，100 μg/mL）;丙酮。
1.3 實验样品
果蔬汁，能力验证样品，由华测检测认证集团股份有限公司（CNAS认可的能力验证提供者）提供。
将购买的橙子用榨汁机榨汁，过滤，离心。加入一定量的毒死蜱标准溶液，涡旋混合均匀，于冰箱中（-4 ℃）冷藏保存，测定前放至室温，混合均匀使用。
1.4 实验方法
1.4.1 实验步骤
果蔬汁样品经过乙腈、丙酮、二氯甲烷及乙酸乙酯等提取，颜色较深的提取液经过石墨化炭黑净化，再用无水硫酸镁或无水硫酸钠进行脱水处理，以NPD、FPD与质谱3种检测器进行检测，外标法定量。
1.4.2 标准溶液的配制
将毒死蜱（GSB05-1869-2016，100 μg/mL）标准原液用色谱纯丙酮稀释成10.0 μg/mL的标准储备液，再次用色谱纯丙酮稀释成1.00 μg/mL的标准使用液，之后用标准使用液准确配制成0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.25 μg/mL、0.50 μg/mL和1.00 μg/mL的标准系列溶液，摇匀冷藏待测。
1.4.3 样品前处理
准确称取5 g果蔬汁样品于塑料离心管中，加入10 mL乙腈或丙酮等有机试剂涡旋振荡5 min后，加入3 g氯化钠再次涡旋振荡1 min，在室温下静置10 min使乙腈和水相分层或者低温离心分层，吸取有机试剂层，用无水硫酸钠或无水硫酸镁进行干燥，再次低温离心，上清液用有机系滤膜过滤后转入进样瓶中待测。
1.4.4 仪器条件
GC-NPD（SHIMADZU，GC-2014）：所用色谱柱为Rtx-5型（30 m×320 μm×0.25 μm）;进样口温度为250 ℃;检测器温度为255 ℃;色谱柱升温程序：初始温度50 ℃保持2 min，15 ℃/min升至250 ℃，保持7 min;柱流量为1.71 mL/min;氢气流速为35 mL/min;空气流速为55 mL/min;进样方式为不分流;进样量为1.0 μL。
GC-FPD（Agilent，7890A）：所用色谱柱为HP-5型（30 m×320 μm×0.25 μm）;进样口温度为250 ℃;检测器温度为200 ℃;色谱柱升温程序：初始温度50 ℃，保持1 min;20 ℃/min升至270 ℃，保持8 min;柱流量为2.0 mL/min;氢气流速为75 mL/min;空气流速为100 mL/min;尾吹流量为60 mL/min;进样方式为分流（分流比1∶1）;进样量为1.0 μL。 GPC-GC-MS（SHIMADZU，QP2010Ultra）：所用色谱柱为Rxi-5Sil MS（30 m×250 μm×0.25 μm），进样口初始温度为120 ℃，后升至250 ℃，色谱柱升温程序：初始温度82 ℃，保持5 min;15 ℃/min升至300 ℃，保持2 min;柱流量为1.75 mL/min;进样方式为不分流;电离方式：电子轰击离子源（EI）70 eV;接口温度为280 ℃;离子源温度为200 ℃;溶剂延迟为9.70 min;扫描方式：SIM模式;载气：高纯氦气，纯度99.999%。
2 结果与分析
2.1 前处理所用的萃取试剂对毒死蜱农药萃取效率的影响
固定加标量为（125 ng/mL），4种不同的萃取试剂（丙酮、乙腈、二氯甲烷/丙酮、乙酸乙酯）对目标分析物萃取效率的影响见图1。由图1可知，4种萃取溶剂中，乙腈的萃取效果较理想。
2.2 氯化钠加入顺序对毒死蜱农药提取效果的影响
在果蔬汁中提取农药残留的前处理方法中，均加入盐（氯化钠或硫酸钠）进行盐析，降低目标分析物在水相中的溶解度，以达到更好的萃取效果。由图2可知，在目标分析物提取过程中，氯化钠在萃取试剂之前或是之后加入，对萃取效果无明显差异。
2.3 提取溶剂的体积对毒死蜱农药萃取效果的影响
固定加标量为（125 ng/mL，理论值），考察4种不同的萃取试剂（丙酮、乙腈、二氯甲烷/丙酮、乙酸乙酯）的体积对目标分析物萃取效率的影响。图3结果表明，萃取试剂体积在5.0～15.0 mL范围内变化时，萃取试剂体积为10.0 mL时，达到较理想的萃取效果，加入两倍体积的萃取试剂时，萃取效率并无明显变化，为了节能减排，后续试验选取萃取试剂体积为10.0 mL。
2.4 使用GC-FPD、GC-NPD、GPC-GC/MS 3种检测器对能力验证样品的分析测定
用样品加标回收试验以及质控样品试验对测定结果进行校正，3种检测器测定结果并无显著性差异（使用单因素方差分析，得P>0.05），测定数据见表1。用GPC-GC/MS对能力验证样品进行分析测定，测定结果见图4。
3 结论与讨论
3.1 建立一种快速准确的前处理方法
摇匀后称取5 g果蔬汁样品，准确加入10 mL乙腈，加入3 g氯化钠，涡旋混匀，低温超声提取10 min，静置后，取上清液适量加入无水硫酸钠干燥，离心后上机测定。
3.2 样品适用性
采用本研究检测方法对能力验证样品中毒死蜱残留量进行检测，能力验证试验取得了满意的结果（Z=0.1），说明以上实验方法有着较好的准确性和实用性，适合果汁中毒死蜱农药残留的检测。
参考文献
[1]李敏青，庄嘉，徐娟，等.固相萃取-气相色谱法测定果汁中多种农药残留[J].食品安全质量检测学报，2018，
9（24）：6508-6514.
[2]SHENDE C，INSCORE F，SENGUPTA A，et al.Surface-enhanced raman spectroscopy： theory and application to the analysis of chlorpyrifos in orange juice[M].john Wiley and Sons，Ltd，2010.
[3]HAZER O，AKKBIK M，DEMIR D，et al.Determination of carbendazim and chlorpyrifos in selected fruits and vegetables samples using QuEChERS-HPLC-FD[J].Eurasian J Anal Chem， 2017，12（2）：17-30.
[4]MOHAMMADREZA MOHAMMAD N，SAJAD A，FAHIMEH M，et al.Electrospun terpolymeric nanofiber membrane for micro solid-phase extraction of diazinon and chlorpyrifos from aqueous samples[J].Journal of Separation Science，2020，43（5）：920-928.
[5]張弛，宋莹，潘家荣，等.气相色谱-质谱大体积进样法测定果汁中90种农药残留[J].分析化学，2015，43（8）：1154-1161.
[6]尚洁，乌日娜.苹果及其浓缩果汁中农药残留分析迚展[J].农药科学与管理，2007（12）：9-12.
[7]耿建暖，仇农学.果汁中农药残留和棒曲霉素及其去除方法的研究进展[J].饮料工业，2004（1）：12-15.
[8]李艳芳，罗华健，梁卫驱，等.果汁中农药残留检测技术研究进展[J].广东农业科学，2012，39（15）：116-118.
[9]李涛，赵云，利光辉，等.水果及果汁中苯并咪唑类农药残留检测技术研究进展[J].粮食与食品工业，2016，23（1）：80-83.
关键词：果蔬汁;毒死蜱;能力验证
我国果蔬资源日益丰富多样[1]，果蔬汁越来越频繁的出现在人们的日常生活中。在过去的50年里，农业发展的一个关键组成部分就是使用杀虫剂来提高果蔬产量。婴幼儿食品中用到了一定比例的果蔬。在过去的10年，毒死蜱一直排在婴幼儿食品中超标杀虫剂的首位。因此，建立快速、有效、安全的样品预处理和检测方法来检测、鉴定和量化毒死蜱农残成为当前研究和探索的热点[2]。
目前，国外的研究大都集中在采用QuEChERS前处理方法结合反相高效液相色谱荧光检测器对水果蔬菜样品中的毒死蜱进行测定，或是使用固相萃取技术与便携式拉曼分析仪相结合的检测方法，以及使用纳米纤维固相萃取法对水和果汁样品进行前处理后用气相色谱测定毒死蜱的含量[3-4]。国内对水果和蔬菜样品中农药多残留的检测方法研究较多，但对于果蔬汁中的农药多残留检测方法却研究较少[5-9]。已有的方法陈旧且耗时较长。而国家标准中关于农药残留的分析检测方法也尚未细化到果蔬汁，所以目前还缺少一些安全、高效且准确的方法作为日常监测果蔬汁中农残的参考。因此，为了有效控制毒死蜱农药残留安全问题，进一步提高果蔬汁的质量安全，实验室通过对试验条件的比对和优化，筛选得到了可快速准确测定果蔬汁中毒死蜱残留量的分析方法，并将筛选得到的方法应用于能力验证，取得了满意的考核结果。为果汁中农药残留分析以及实验室面临的考核工作提供更多借鉴和参考。
1 材料与方法
1.1 主要仪器
Agilent7890A气相色谱仪（FPD检测器，美国安捷伦科技有限公司）;岛津GC-2014气相色谱仪（NPD检测器，岛津国际贸易有限公司）;凝胶渗透色谱-气相色谱-四级杆质谱联用仪（岛津国际贸易有限公司）;氮吹仪OA-HEAT Heating System（Organomation）;离心机Thermo Electron LED GmbH D-37520 Osterode（ThermoFisher SCIENTIFIC）;邦洁BG-08C超声波仪（广州邦洁电子产品有限公司）;其林贝尔VORTEX/KB3涡旋均质器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）。
1.2 试剂及标准溶液
丙酮（色谱纯，霍尼韦尔（中国）有限公司）;乙腈（色谱纯，西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司）;无水硫酸镁（分析纯，使用前于600 ℃烘烤4 h）;氯化钠（分析纯，使用前于120 ℃烘烤4 h）;无水硫酸钠（分析纯，使用前于600 ℃烘烤4 h）;二氯甲烷（色谱纯，赛默飞世尔科技（中国）有限公司）;正己烷（色谱纯，韩国德山公司）;毒死蜱（GSB05-1869-2016，100 μg/mL）;丙酮。
1.3 實验样品
果蔬汁，能力验证样品，由华测检测认证集团股份有限公司（CNAS认可的能力验证提供者）提供。
将购买的橙子用榨汁机榨汁，过滤，离心。加入一定量的毒死蜱标准溶液，涡旋混合均匀，于冰箱中（-4 ℃）冷藏保存，测定前放至室温，混合均匀使用。
1.4 实验方法
1.4.1 实验步骤
果蔬汁样品经过乙腈、丙酮、二氯甲烷及乙酸乙酯等提取，颜色较深的提取液经过石墨化炭黑净化，再用无水硫酸镁或无水硫酸钠进行脱水处理，以NPD、FPD与质谱3种检测器进行检测，外标法定量。
1.4.2 标准溶液的配制
将毒死蜱（GSB05-1869-2016，100 μg/mL）标准原液用色谱纯丙酮稀释成10.0 μg/mL的标准储备液，再次用色谱纯丙酮稀释成1.00 μg/mL的标准使用液，之后用标准使用液准确配制成0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.25 μg/mL、0.50 μg/mL和1.00 μg/mL的标准系列溶液，摇匀冷藏待测。
1.4.3 样品前处理
准确称取5 g果蔬汁样品于塑料离心管中，加入10 mL乙腈或丙酮等有机试剂涡旋振荡5 min后，加入3 g氯化钠再次涡旋振荡1 min，在室温下静置10 min使乙腈和水相分层或者低温离心分层，吸取有机试剂层，用无水硫酸钠或无水硫酸镁进行干燥，再次低温离心，上清液用有机系滤膜过滤后转入进样瓶中待测。
1.4.4 仪器条件
GC-NPD（SHIMADZU，GC-2014）：所用色谱柱为Rtx-5型（30 m×320 μm×0.25 μm）;进样口温度为250 ℃;检测器温度为255 ℃;色谱柱升温程序：初始温度50 ℃保持2 min，15 ℃/min升至250 ℃，保持7 min;柱流量为1.71 mL/min;氢气流速为35 mL/min;空气流速为55 mL/min;进样方式为不分流;进样量为1.0 μL。
GC-FPD（Agilent，7890A）：所用色谱柱为HP-5型（30 m×320 μm×0.25 μm）;进样口温度为250 ℃;检测器温度为200 ℃;色谱柱升温程序：初始温度50 ℃，保持1 min;20 ℃/min升至270 ℃，保持8 min;柱流量为2.0 mL/min;氢气流速为75 mL/min;空气流速为100 mL/min;尾吹流量为60 mL/min;进样方式为分流（分流比1∶1）;进样量为1.0 μL。 GPC-GC-MS（SHIMADZU，QP2010Ultra）：所用色谱柱为Rxi-5Sil MS（30 m×250 μm×0.25 μm），进样口初始温度为120 ℃，后升至250 ℃，色谱柱升温程序：初始温度82 ℃，保持5 min;15 ℃/min升至300 ℃，保持2 min;柱流量为1.75 mL/min;进样方式为不分流;电离方式：电子轰击离子源（EI）70 eV;接口温度为280 ℃;离子源温度为200 ℃;溶剂延迟为9.70 min;扫描方式：SIM模式;载气：高纯氦气，纯度99.999%。
2 结果与分析
2.1 前处理所用的萃取试剂对毒死蜱农药萃取效率的影响
固定加标量为（125 ng/mL），4种不同的萃取试剂（丙酮、乙腈、二氯甲烷/丙酮、乙酸乙酯）对目标分析物萃取效率的影响见图1。由图1可知，4种萃取溶剂中，乙腈的萃取效果较理想。
2.2 氯化钠加入顺序对毒死蜱农药提取效果的影响
在果蔬汁中提取农药残留的前处理方法中，均加入盐（氯化钠或硫酸钠）进行盐析，降低目标分析物在水相中的溶解度，以达到更好的萃取效果。由图2可知，在目标分析物提取过程中，氯化钠在萃取试剂之前或是之后加入，对萃取效果无明显差异。
2.3 提取溶剂的体积对毒死蜱农药萃取效果的影响
固定加标量为（125 ng/mL，理论值），考察4种不同的萃取试剂（丙酮、乙腈、二氯甲烷/丙酮、乙酸乙酯）的体积对目标分析物萃取效率的影响。图3结果表明，萃取试剂体积在5.0～15.0 mL范围内变化时，萃取试剂体积为10.0 mL时，达到较理想的萃取效果，加入两倍体积的萃取试剂时，萃取效率并无明显变化，为了节能减排，后续试验选取萃取试剂体积为10.0 mL。
2.4 使用GC-FPD、GC-NPD、GPC-GC/MS 3种检测器对能力验证样品的分析测定
用样品加标回收试验以及质控样品试验对测定结果进行校正，3种检测器测定结果并无显著性差异（使用单因素方差分析，得P>0.05），测定数据见表1。用GPC-GC/MS对能力验证样品进行分析测定，测定结果见图4。
3 结论与讨论
3.1 建立一种快速准确的前处理方法
摇匀后称取5 g果蔬汁样品，准确加入10 mL乙腈，加入3 g氯化钠，涡旋混匀，低温超声提取10 min，静置后，取上清液适量加入无水硫酸钠干燥，离心后上机测定。
3.2 样品适用性
采用本研究检测方法对能力验证样品中毒死蜱残留量进行检测，能力验证试验取得了满意的结果（Z=0.1），说明以上实验方法有着较好的准确性和实用性，适合果汁中毒死蜱农药残留的检测。
参考文献
[1]李敏青，庄嘉，徐娟，等.固相萃取-气相色谱法测定果汁中多种农药残留[J].食品安全质量检测学报，2018，
9（24）：6508-6514.
[2]SHENDE C，INSCORE F，SENGUPTA A，et al.Surface-enhanced raman spectroscopy： theory and application to the analysis of chlorpyrifos in orange juice[M].john Wiley and Sons，Ltd，2010.
[3]HAZER O，AKKBIK M，DEMIR D，et al.Determination of carbendazim and chlorpyrifos in selected fruits and vegetables samples using QuEChERS-HPLC-FD[J].Eurasian J Anal Chem， 2017，12（2）：17-30.
[4]MOHAMMADREZA MOHAMMAD N，SAJAD A，FAHIMEH M，et al.Electrospun terpolymeric nanofiber membrane for micro solid-phase extraction of diazinon and chlorpyrifos from aqueous samples[J].Journal of Separation Science，2020，43（5）：920-928.
[5]張弛，宋莹，潘家荣，等.气相色谱-质谱大体积进样法测定果汁中90种农药残留[J].分析化学，2015，43（8）：1154-1161.
[6]尚洁，乌日娜.苹果及其浓缩果汁中农药残留分析迚展[J].农药科学与管理，2007（12）：9-12.
[7]耿建暖，仇农学.果汁中农药残留和棒曲霉素及其去除方法的研究进展[J].饮料工业，2004（1）：12-15.
[8]李艳芳，罗华健，梁卫驱，等.果汁中农药残留检测技术研究进展[J].广东农业科学，2012，39（15）：116-118.
[9]李涛，赵云，利光辉，等.水果及果汁中苯并咪唑类农药残留检测技术研究进展[J].粮食与食品工业，2016，23（1）：80-83.