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目的：对拟南芥CBF4基因序列进行克隆。方法：用限制性内切酶将CBF4基因从pMD18-T CBF4载体上切下,定向连接到含超强启动子的pC2301-35S-OCS表达载体上,成功构建了CBF4基因植物表达载体pC2301-35S-OCS-CBF4。利用冻融法将此表达载体导入只含辅助质粒的根癌农杆菌中,提取转化质粒,经PCR扩增和酶切验证鉴定表明。结果：CBF4基因植物表达双元载体构建成功。结论：转CBF4基因烟草的抗寒性比野生型烟草要高。