【摘 要】
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以中国春小麦叶、茎、幼穗及花后3、6、9、12、15、20、25d的籽粒为材料,利用 Gateway技术构建中国春小麦c DNA初级文库和次级文库,由次级文库质粒转化 Y187酵母菌株构建出酵母双杂交文库。通过 mating法筛选小麦粒质量基因Ta DAR1的 互 作 蛋 白,以 此 来 鉴 定 文 库 的 有 效 性。结 果 表 明:初 级 文 库 容 量 为1.82×10~7CFU/m L、次
【基金项目】
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陕西省农业协同创新与推广联盟重大科技项目（LMZD202104）； 西北农林科技大学实验技术研究与实验室管理创新项目（SY20210227）；
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以中国春小麦叶、茎、幼穗及花后3、6、9、12、15、20、25d的籽粒为材料,利用 Gateway技术构建中国春小麦c DNA初级文库和次级文库,由次级文库质粒转化 Y187酵母菌株构建出酵母双杂交文库。通过 mating法筛选小麦粒质量基因Ta DAR1的 互 作 蛋 白,以 此 来 鉴 定 文 库 的 有 效 性。结 果 表 明:初 级 文 库 容 量 为1.82×10~7CFU/m L、次级文库的容量为1.91×10~7CFU/m L,文库重组率均大于 96%,插入片段平均长度在1000bp以上。酵母双杂交文库转化效率为1.97×10~5CFU/μg,文库容量为2.04×10~7CFU/m L。构建诱饵载体p GBKT7-Ta DAR1并转化Y2H酵母菌株,经检验存在自激活现象,进一步截断检测发现此蛋白 N 端无自激活,C端有自激活,以 BD-Ta DAR1-N 为诱饵 载 体,筛 选 酵 母 文 库,获 得 其 互 作 蛋 白 序 列,并 命 名 为 TaDAR1IP,经回转验证 Ta DAR1-N 与 Ta DAR1IP存在相互作用关系。表明本实验方案构建的酵母文库是高质量的有效的。为初学者构建酵母双杂文库及使用“mating”法筛选酵母文库提供借鉴,也为后续小麦基因功能的研究奠定基础。
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