【摘 要】
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作者将含人脑髓鞘碱性蛋白(MBP)编码区和3’端非翻译区(1.2kb)的重组质粒pRK41—1.2转化宿主菌E.coli JM109,用非同位素标记鼠MBP cDNA克隆片段作探针,经菌落原位杂交筛选出
【机 构】
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作者将含人脑髓鞘碱性蛋白(MBP)编码区和3’端非翻译区(1.2kb)的重组质粒pRK41—1.2转化宿主菌E.coli JM109,用非同位素标记鼠MBP cDNA克隆片段作探针,经菌落原位杂交筛选出阳性克隆并以此为模板,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增出含21.5kd MBP全长编码序列(600bp),又经限制性内切酶BamHⅠ和KpnⅠ消化,电泳结果进一步证实该PCR产物的特异性,为人MBP全长编码序列。
The recombinant plasmid pRK41-1.2 containing the human MBP coding region and 3’-untranslated region (1.2kb) was transformed into host strain E. coli JM109, and the non-isotopic labeled murine MBP cDNA clone fragment was used to probe The positive clones were screened by in situ hybridization and used as a template to amplify the full-length coding sequence of 21.5 kd MBP (600 bp) by polymerase chain reaction (PCR). The restriction endonuclease BamH I and Kpn Ⅰ digestion, electrophoresis results further confirmed the specificity of the PCR product, human MBP full-length coding sequence.
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