研究小鼠衰老耳蜗血迷路屏障通透性的变化,并通过建立内皮细胞(endothelial cells,EC)系和周细胞(pericytes,PC)系非接触式共培养模型,进一步探讨耳蜗血管纹微血管PC对EC通透性的影响。
方法C57BL/6J小鼠分为2组:3月龄为年轻组,12月龄为衰老组;细胞实验分为4组:EC组、EC+PC共培养组、D-半乳糖(D-gal)+EC组和D-gal+EC+PC共培养组。听性脑干反应(auditory brain response,ABR)检测2组小鼠听觉功能;伊文思蓝(evans blue)染色检测2组小鼠耳蜗血迷路屏障的通透性;透射电镜观察2组小鼠血迷路屏障EC、PC和紧密连接结构;免疫荧光检测2组小鼠耳蜗血管纹上紧密连接蛋白表达水平;Transwell小室检测EC通透性;Western blot及免疫荧光技术检测EC上紧密连接蛋白的表达水平。以SPSS 20.0软件进行统计学分析。
结果与年轻组相比,衰老组小鼠ABR阈值明显升高且Ⅰ波潜伏期延长(t=10.25,P<0.01;t=5.61,P<0.05)、耳蜗血迷路屏障通透性升高且血管纹上紧密连接蛋白的表达降低(P值均<0.05);耳蜗超微结构显示衰老小鼠耳蜗血管纹微血管管腔变形、基底膜增厚、内皮间紧密连接间隙增大;原代培养的EC和PC阳性率达95%以上;并确定15 g/L D-gal诱导的细胞为衰老细胞;与EC组相比,D-gal+EC组EC的紧密连接蛋白表达降低(t=7.42,P<0.01;t=13.19,P<0.05),通透性增加(t=11.17,P<0.01);在共培养组中,EC+PC共培养组和D-gal+EC+PC共培养组EC间紧密连接蛋白表达均增加,通透性均降低。
结论衰老小鼠耳蜗血迷路屏障的通透性升高,紧密连接蛋白水平降低;衰老状态下,耳蜗血管纹微血管PC可能通过调节紧密连接蛋白的表达进而影响EC通透性。