靶向下调PKM2表达对骨肉瘤细胞增殖与侵袭影响

来源 :中华肿瘤防治杂志 | 被引量 : 3次 | 上传用户:safafaffaf
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目的骨肉瘤是常见的原发性骨恶性肿瘤,M型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)被证实与多种肿瘤进展具有相关性。本实验前期已从组织水平证明了PKM2与骨肉瘤的相关性,本研究从细胞水平探讨PKM2表达对骨肉瘤增殖与侵袭的影响,挖掘PKM2在骨肉瘤早期诊断、治疗靶点和预后评估的价值。方法将携带靶向下调序列PKM-homo-609的siRNA转染骨肉瘤MG63细胞设为实验组(si609组),转染无关序列的MG63细胞为阴性对照组(NC组),正常培养的MG63细胞为空白对照组(KB组),通过蛋白质印迹法检测PKM2在蛋白水平的表达变化。CCK8实验、平板克隆实验检测下调PKM2表达后对骨肉瘤细胞MG63增殖能力的影响。Transwell实验检测下调PKM2后对骨肉瘤细胞MG63侵袭能力的影响。结果 si609组(S-W=0.997,P=0.962)、NC组(S-W=0.750,P=0.342)和KB组(S-W=0.998,P=0.794)的PKM2相对表达量均符合正态分布,si609组(0.48±0.15)分别与NC组(1.40±0.06)、KB组(1.42±0.16)比较,差异均有统计学意义,均P<0.05。CCK8增殖试验中,48hsi609组(S-W=0.783,P=0.324)、NC组(S-W=0.916,P=0.439)和KB组(S-W=1,P=1)吸光度(A)值均符合正态分布,si609组分别与NC组、KB组比较,差异均有统计学意义,均P<0.05。72hsi609组(S-W=1.000,P=1.000)、NC组(S-W=0.855,P=0.253)和KB组(S-W=0.812,P=0.144)A值均符合正态分布。3组组间比较,48h(F=12.250,P=0.008)和72h(F=114.590,P<0.001)差异有统计学意义。平板克隆实验中,si609组(S-W=0.997,P=0.900)、NC组(S-W=0.871,P=0.298)和KB组(S-W=0.991,P=0.817)的细胞克隆计数均符合正态分布;3组细胞克隆计数差异有统计学意义,F=65.73,P<0.001;进一步两两比较,si609组分别与KB组、NC组比较,差异均有统计学意义,均P<0.001。Transwell实验中,si609组(S-W=0.948,P=0.650)、NC组(S-W=0.813,P=0.212)和KB组(S-W=0.91,P=0.30)的穿膜细胞数均符合正态分布;3组穿膜细胞数差异有统计学意义(F=45.056,P<0.001),且si609组分别与KB组和NC组比较,差异均有统计学意义,均P<0.001。结论下调PKM2表达,骨肉瘤细胞增殖与侵袭能力均下降,说明PKM2能促进骨肉瘤细胞的增殖和侵袭。
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