【摘 要】
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目的:建立一种新的检测人类HLA-Ⅰ类抗体方法--酶联免疫斑点法(ELISpot).方法:以鼠B细胞系HB95为模型,建立一系列特异性ELISpot检测HLA-Ⅰ类抗体的参数,包括HLA抗原的来源、
【机 构】
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华中科技大学同济医学院生殖医学中心,德国埃森大学医学院免疫研究所
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目的:建立一种新的检测人类HLA-Ⅰ类抗体方法--酶联免疫斑点法(ELISpot).方法:以鼠B细胞系HB95为模型,建立一系列特异性ELISpot检测HLA-Ⅰ类抗体的参数,包括HLA抗原的来源、包被抗体最适宜浓度的选择、B细胞最适宜孵化时间,同时以经EBV转化的敏感NTP患者B细胞系为干扰因素,检验该方法的敏感性和特异性.结果:以B细胞溶胞体作为HLA抗原来源,当抗原浓度为0.25mg/ml时,相同细胞密度下所获得的斑点频数均高于其它三种抗原浓度(0.125、0.5和1.0 mg/ml,P＜0.05);当包被抗体浓度为1.8 mg/ml、稀释度为1:125时,相同孵育时间下所获得的斑点频数高于其它稀释浓度(1:250、1:500和1:1 000,P＜0.05);且在抗体稀释度相同情况下,B细胞孵育时间为24小时所获得的斑点最清晰、背景着色最浅、最容易被分析仪器识别.此外,当同时加入经EBV转化的人B细胞时,所获得的斑点频数与单纯加鼠B细胞相似,无明显差异(P＞0.05).结论:当B细胞溶胞体作为HLA抗原且浓度为0.25 mg/ml、包被抗体浓度为1.8 mg/ml且稀释度为1:125、B细胞孵育时间为24小时时,该ELISpot方法能特异地、敏感地、可信地检测人HLA-Ⅰ类抗体.
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