【摘 要】
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目的探讨分离提取及鉴定胚胎干细胞(ESC)产生的微囊体(MV)的实验方法,初步研究其促造血的生物学作用。方法利用超滤离心的方法从小鼠ESC培养上清液中分离提纯MV(ES-MV),以小
【机 构】
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贵阳医学院附属医院儿科,贵阳市第一人民医院检验科
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目的探讨分离提取及鉴定胚胎干细胞(ESC)产生的微囊体(MV)的实验方法,初步研究其促造血的生物学作用。方法利用超滤离心的方法从小鼠ESC培养上清液中分离提纯MV(ES-MV),以小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)培养上清来源的MV(MEF-MV)为对照;采用透射电镜形态学观察,RT-PCR检测特异性基因表达的方法对ES-MV进行鉴定;将ES-MV用于环磷酰胺所致骨髓抑制小鼠,通过骨髓涂片初步观察其对造血的恢复作用。结果透射电镜下观察,ES-MV呈明显异质性的圆形或椭圆形小囊泡,直径约30 nm-1μm不等,有完整的包膜,内为低电子密度物质。RT-PCR方法从ES-MV中可检测到Oct-4、Wnt-3、Hoxb4基因的表达,而MEF-MV内不能检测到这些基因的表达;将ES-MV用于骨髓抑制小鼠后,骨髓涂片显示成熟红细胞和有核细胞比例明显升高。结论 ESC可以产生MV,并且是MV的丰富来源;超滤离心法是一种方便实用的提取ES-MV的方法;ES-MV对促进骨髓造血有一定的作用。
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