【摘 要】
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背景与目的 milk-145是通过miRNA芯片及qPCR验证筛选出的一种潜在肺癌保护性mRNA.本研究旨在探讨milk-145与肺癌干细胞之间的关系及分子机制.方法 miRNAZL片对肺腺癌患者瘤旁
【机 构】
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南京医科大学附属江苏省肿瘤医院胸外科,南京,210009;
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背景与目的 milk-145是通过miRNA芯片及qPCR验证筛选出的一种潜在肺癌保护性mRNA.本研究旨在探讨milk-145与肺癌干细胞之间的关系及分子机制.方法 miRNAZL片对肺腺癌患者瘤旁和正常组织进行表达谱分析;生物信息学软件预测milk-145潜在的靶基因;脂质体2000介导转染milk-145模拟物和阻遏物进人A549细胞株;实时定量PCR检测milk-145表达水平;West blot检测OCT4蛋白水平;双荧光素酶报告基因验证milk-145是否作用于OCT4 mRNA的3UTR区预测靶位;细胞增殖实验检测milk-145对于A549细胞生长的作用;流式细胞术检测干细胞表型CD 133的表达.结果 在肺腺癌组织中milk-145表达明显低于瘤旁正常组织;miRanda软件预测OCT4是milk-145潜在靶基因;与对照组相比,milk-145模拟物组和阻遏物组milk-145表达分别明显上调和下调;milk-145对A549细胞的生长有双向调节作用,过表达milk-145抑制细胞生长;过表达milk-145可明显降低OCT4蛋白水平及干细胞表型CD 133百分比,而抑制milk-145表达则明显增加OCT4蛋白水平及CD 133百分比.双荧光素酶报告基因检测证明milk-145可作用于OCT4 mRNA的3UTR区预测靶位.结论 milk-145可通过下调OCT4基因表达抑制A549肺腺癌细胞株中干细胞的增殖,是一种潜在的肺癌保护性miRNA.
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