【摘 要】
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将鸡催乳素(PRL)和抑制素-α亚基(INB-a)基因编码序列重组为融合基因,制备了同时包含这2种激素基因的融合蛋白通过PCR和分子克隆的方法首先将全部粤黄鸡PRL成熟肽cDNA克隆到
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将鸡催乳素(PRL)和抑制素-α亚基(INB-a)基因编码序列重组为融合基因,制备了同时包含这2种激素基因的融合蛋白通过PCR和分子克隆的方法首先将全部粤黄鸡PRL成熟肽cDNA克隆到载体pRSET A的BglⅡ和EcoRⅠ克隆位点之间.获得重组质粒pPRL～RSET.鸡INB-α片段经扩增后分别被克隆到质粒pRSET A和pPRLRSET的Nhe 1和Xho1克隆位点之间,获得重组质粒pINB-RSET和pINB-PRL.以上重组质粒构建的正确性分别由各特定引物组合扩增的PCR产物长度、特定限制性内切酶消化各重组质粒所得产物长度以及对各质粒的测序结果得到验证.重组质粒pPRLRSET和pINB-PRL转化E.coli BL21(DE3)株,IPTG诱导后所表达的产物经SDS-PAGE显示,其分别与所预期的重组蛋白分子大小相符.质粒pPRL-RSET和pINB-PRL的表达产物和用Ni-NTA凝胶纯化的2重组蛋白产物部可与抗鸡PRL抗体产生特异的免疫印迹,并且表达茵裂解液和相应纯化蛋白的免疫印迹处于同一位置结果说明.试验已成功完成了鸡PRL、INB a及2者融合蛋白的构建、表达和纯化.
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