探讨含纳米银的胶原蛋白-丝素蛋白支架对大鼠全层皮肤缺损创面真皮再生的影响。
方法采用冷冻干燥法分别制备81个含纳米银的胶原蛋白-丝素蛋白支架(纳米银质量浓度为10 mg/L)及81个不含纳米银的胶原蛋白-丝素蛋白支架,分别归为纳米银支架组和对照支架组。每组取9个支架加入人Fb培养,于培养2、12、24 h每组取3孔支架,计数2组支架区域黏附人Fb。于36只SD大鼠背部各制作4个全层皮肤缺损创面,将大鼠按随机数字表法平均分为纳米银支架组和对照支架组,创面分别移植含纳米银的胶原蛋白-丝素蛋白支架和不含纳米银的胶原蛋白-丝素蛋白支架。于术后1、2、4周,每组分别取6只大鼠处死,对创面进行大体观察,HE染色观察组织结构、炎性细胞浸润及胶原沉积情况,免疫组织化学染色观察计数CD68阳性细胞,实时荧光定量RT-PCR法检测创面IL-6和IL-10的mRNA表达。对数据行析因设计方差分析、t检验及Bonferroni校正。
结果(1)培养2、12、24 h,纳米银支架组和对照支架组支架区域人Fb黏附数量相近(t值为1.77~2.60,P值均大于0.05)。(2)术后1周,纳米银支架组大鼠创面及创缘未见明显感染迹象,支架血管化明显;对照支架组大鼠创面出现明显感染迹象,小部分支架脱落。术后2周,纳米银支架组大鼠创面移植支架与创面贴附牢固;对照支架组大鼠创面挛缩明显,大部分支架已脱落。术后4周,纳米银支架组大鼠创面移植支架已成功覆盖创面,支架表面已明显上皮化;对照支架组大鼠创面移植支架完全脱落,残余创面明显收缩。(3)术后1、2周,与对照支架组比较,纳米银支架组大鼠创面胶原分泌及组织再生更多,支架内部炎性细胞浸润较少。术后4周,纳米银支架组大鼠创面已明显上皮化;而对照支架组大鼠创面仍有炎性细胞浸润,未见明显上皮化。(4)术后1周,纳米银支架组大鼠创面CD68阳性细胞数为(54±10)个/mm2,与对照支架组的(78±7)个/mm2无明显差异(t=1.52,P>0.05)。术后2、4周,纳米银支架组大鼠创面CD68阳性细胞数分别为(154±10)、(77±7)个/mm2,均明显少于对照支架组的(268±16)、(136±13)个/mm2(t值分别为7.31和3.83,P值均小于0.01)。(5)除术后4周(t=1.23,P>0.05)外,术后1、2周纳米银支架组大鼠创面IL-6的mRNA表达量均明显低于对照支架组(t值分别为13.12和4.65,P值均小于0.01)。除术后1周(t=3.08,P<0.05)外,术后2、4周2组大鼠创面IL-10的mRNA表达量均相近(t值分别为2.14和0.49,P值均大于0.05)。
结论含纳米银的胶原蛋白-丝素蛋白支架不仅具有良好的生物相容性,同时具有明显的炎症调节作用,可加快胶原蛋白-丝素蛋白支架诱导真皮再生,促进创面修复。