【摘 要】
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为表达和纯化尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a蛋白，本研究从尼罗罗非鱼卵巢提取总RNA，反转录获得cDNA模板后，利用设计的引物PCR扩增cyp19a1aORF区1200 bp片段，双酶切
【机 构】
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南昌大学生命科学学院南昌 330031; 山东农业大学动物科技学院泰安 271018;南昌大学生命科学学院南昌 330031;山东农业大学动物科技学院泰安 271018;
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为表达和纯化尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a蛋白，本研究从尼罗罗非鱼卵巢提取总RNA，反转录获得cDNA模板后，利用设计的引物PCR扩增cyp19a1aORF区1200 bp片段，双酶切后连接到 pET-28a(＋)表达载体上，经酶切验证和 DNA 测序鉴定，证明成功构建了pET-28a-cyp19a1a原核表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌(E.coli) BL21中，优化IPTG诱导浓度和诱导时间。结果显示，在0.5 mmol/L IPTG诱导8 h后，cyp19a1a重组蛋白大量表达，并以包涵体形式存在。通过 Ni2+-NTA 层析柱和切胶纯化，获得与预期片段大小一致的表达蛋白，并用West blotting验证了纯化的蛋白为目的蛋白。本研究为制备cyp19a1a抗体和研究高温对cyp19a1a蛋白表达的影响提供了重要的基础。
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