【摘 要】
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【背景】重组酿酒酵母广泛应用于生产工业酶和药用蛋白，但是目前仍旧存在异源蛋白产量低、分泌效率差的问题，限制了生产应用。【目的】提高酿酒酵母异源分泌蛋白的能力，构建高效
【机 构】
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微生物代谢国家重点实验室上海交通大学生命科学技术学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金(31461143029，51561145014)
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【背景】重组酿酒酵母广泛应用于生产工业酶和药用蛋白，但是目前仍旧存在异源蛋白产量低、分泌效率差的问题，限制了生产应用。【目的】提高酿酒酵母异源分泌蛋白的能力，构建高效的异源蛋白生产酵母细胞工厂。【方法】采用基于CRISPR/Cas9的基因组编辑技术，以生产β-葡萄糖苷酶的重组酿酒酵母Y294-BGL为出发菌株，构建细胞壁蛋白基因CWP2破坏突变体。【结果】与出发菌株相比，破坏CWP2的突变体在发酵96 h时，胞外β-葡萄糖苷酶酶活性可提高53%，胞内酶活提高208%。并且，突变体生长未受到影响，对弱酸等环境胁迫的耐性没有下降，未造成过多内质网胁迫。进一步检测发现，突变体胞内活性氧水平下降，同时蛋白胞内运输和分泌途径相关的关键基因表达转录及多个细胞壁生物合成相关基因表达下降。【结论】破坏细胞壁蛋白基因能够提高异源蛋白β-葡萄糖苷酶的胞外酶活，可作为促进酿酒酵母生产异源蛋白的靶点基因。
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