运用双杂交系统探寻与内皮素A型受体相互作用的蛋白质

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目的:运用酵母双杂交系统寻找与内皮素A型受体(endothelintypeAreceptor,ETAR)相互作用的蛋白质,为探讨心血管等疾病的致病机理及采取相应的治疗策略提供理论依据。方法:首先将ETAR胞内区cDNA片段克隆入pGBT9质粒载体中,得到的重组质粒pGBT9-ETAR转化酵母菌HF7C,然后将鼠胚胎文库质粒转化到HF7C(pGBT9-ETAR)中,用Trp-Leu-His-营养缺陷型培养基初步筛选文库中插入cDNA所编码的序列与ETAR胞内区相互作用的菌落,再进一步检测β-半乳糖苷酶活性。结果:共得到数个β-半乳糖苷酶活性为阳性的酵母菌落。提取阳性酵母菌落的质粒,电击转化E.coliHB101(Leu-),用Leu-培养基筛选只含有文库质粒的菌落。提取质粒DNA并测序。结论:文库质粒中插入的cDNA经序列分析和Genbank检索表明,该cDNA编码为与发育相关的蛋白质tex261。
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