观察C-fos、TERT、Survivin、E2F1、Cox2及CMV启动子在人胶质瘤细胞株U87、U373、U251中的转录活性以及C-fos、CMV启动子在正常组织中的转录活性。
方法设计引物并应用PCR法从人胶质瘤基因组中克隆C-fos、TERT、Survivin、E2F1、Cox2启动子。将上述5种启动子以及CMV启动子序列插入到pGL4-Basic报告载体中。将构建的pGL4-Cfos、pGL4-TERT、pGL4-Survivin、pGL4-E2F1、pGL4-Cox2、pGL4-CMV重组质粒和内参质粒pRL-TK瞬时共转染胶质瘤细胞U87、U373、U251，双荧光素酶实验检测各启动子的转录活性；C57BL/6J小鼠10只，分为C-fos组、CMV组，每组5只，分别由尾静脉注射600 μL含40 μg pGL4-Cfos-luc、pGL4-CMV-luc质粒的生理盐水，24 h后检测小鼠心、肝、脾、肺组织中荧光素酶的活性。
结果各启动子基因序列经测序确认正确；TERT、Survivin、Cox2、E2F1、C-fos启动子的转录活性(相对于CMV启动子)在U87细胞中依次为0.03%、0.33%、0.38%、0.24%、3.73%；在U373细胞中依次为0.95%、65.34%、0.32%、9.07%、70.83%，在U251细胞中依次为0.41%、15.57%、0.15%、0.51%、17.30%；CMV组小鼠心、肝、脾、肺组织荧光素酶活性依次为(93.40±75.06)RLU/mg蛋白、(12.33±6.49)RLU/mg蛋白、(22.60±7.50)RLU/mg蛋白、(950.47±538.74)RLU/mg蛋白；C-fos组小鼠心、肝、脾、肺组织荧光素酶活性依次为(2.13±1.92)RLU/mg蛋白、(1.11 ±0.95)RLU/mg蛋白、(2.07±1.51)RLU/mg蛋白、(29.24±25.89)RLU/mg蛋白，与CMV组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论C-fos启动子在人胶质瘤细胞株中的转录活性高于TERT、Survivin、E2F1、Cox2，在正常组织中的转录活性低于CMV启动子。