【摘 要】
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目的探讨MAPK家族中P38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）、c-Jun氨基端激酶（JNK）信号通路在百草枯（Paraquat, PQ）诱导的肺泡上皮细胞上皮-间质转分化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）中的作用。方法在体外培养的大鼠肺泡II型上皮细胞（RLE-6TN）中加入不同浓度PQ（0、25、50、100 μm
【机 构】
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750004 银川，宁夏医科大学公共卫生与管理学院，职业卫生与环境卫生学系,750004 银川，宁夏医科大学公共卫生与管理学院，职业卫生与环境卫生学系,750004 银川，宁夏医科大学公共卫生与管理学
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目的探讨MAPK家族中P38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）、c-Jun氨基端激酶（JNK）信号通路在百草枯（Paraquat, PQ）诱导的肺泡上皮细胞上皮-间质转分化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）中的作用。
方法在体外培养的大鼠肺泡II型上皮细胞（RLE-6TN）中加入不同浓度PQ（0、25、50、100 μmol/L）后共培养6、12、24 h。倒置相差显微镜观察细胞形态学改变，划痕实验评估细胞迁移能力，免疫印迹法（Western blot）检测上皮及间质细胞表型蛋白表达（上皮细胞表型蛋白：E-cad、ZO-1，间质细胞表型蛋白：Vimentin、а-SMA）、MAPK信号通路关键蛋白的表达（P-p38 MAPK、P-Erk1/2、P-JNK），实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测成纤维细胞/肌成纤维细胞（MFB/FB）主要产物COL-I、COL-III、Fn和EMT来源的成纤维细胞标志物FSP-1的基因表达。
结果100 μmol/L PQ分别处理6、12、24 h，细胞由卵圆形或多边形的上皮细胞变成长梭形的间质细胞，细胞间连接消失，且时间越长形态学改变越明显。与对照组比较，50、100、200、300 μmol/L PQ处理24 h的细胞存活率明显下降，200 μmol/L PQ作用于细胞的时间越长（6、12、24、36、48 h），细胞存活率越低；与对照组比较，50、100 μmol/L PQ诱导上皮细胞标记蛋白E-cad、ZO-1蛋白表达下调，且下调的趋势随时间延长更加明显，差异有统计学意义（P<0.05）；同时，随着PQ诱导剂量的升高、时间的延长，间质细胞标记蛋白α-SMA、vimentin蛋白表达逐渐升高，差异有统计学意义（P<0.05）。划痕实验结果显示，与对照组比较，100 μmol/L PQ处理24 h后的细胞迁移能力明显增强，差异有统计学意义（P<0.05）；与对照组比较，100 μmol/L PQ诱导细胞24 h后，P-p38MAPK、P-JNK及P-Erk1/2蛋白表达显著上调，差异有统计学意义（P<0.05），分别给予上述蛋白的抑制剂进行干预后，蛋白磷酸化水平较诱导组均明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）；RT-PCR结果显示，与对照组比较，PQ促进了Fn、COL-I、COL-III、FSP-1 mRNA表达水平，差异有统计学意义（P<0.05）。
结论PQ诱导肺泡上皮细胞通过EMT转变为间质细胞，可能为MFB的一个重要来源；MAPK家族中p38 MAPK、ERK、JNK信号通路参与了PQ诱导EMT的发生。
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