【摘 要】
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以pcDNA3.1/IGF-1为模板,采用PCR方法对IGF-1基因进行扩增,EcoRⅠ和SalⅠ酶切回收含IGF-1基因的DNA片段,与pFastHTA连接,获得重组载体pFast/IGF-1;将其转化大肠杆菌(Escheric
【基金项目】
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北京市科委科技合同资金项目(No.954024800)资助。
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以pcDNA3.1/IGF-1为模板,采用PCR方法对IGF-1基因进行扩增,EcoRⅠ和SalⅠ酶切回收含IGF-1基因的DNA片段,与pFastHTA连接,获得重组载体pFast/IGF-1;将其转化大肠杆菌(Escherichiacoli)DH10Bac感受态细胞,经卡那霉素、四环素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-IGF-1,PCR鉴定得到单一IGF-1条带。将该病毒载体转染sf9细胞,进行病毒重组,Western-blot检测IGF-1表达,并用MTT法检测促内皮细胞生长活性。结果成功获得了重组病毒,Western-blot检测出现1条约13.0kD的带,MTT法检测IGF-1促细胞生长率为24.4%。
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