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目的
探讨如何优化羊等大型哺乳类动物的脂肪基质干细胞(ADSCs)的生物活性及适应体外成骨分化,并建立一种羊脂肪基质干细胞体外诱导成骨的改良方法。
方法从2013年3月至2014年9月,取安哥拉羊静脉血制备自体源性富血小板血浆(PRP),并取羊腹部脂肪,经系列原代与传代培养,如下诱导羊骨化脂肪基质干细胞,并分为4组:联合诱导组(富血小板血浆加人重组骨形态发生蛋白-2加ADSCs)、成骨因子组(人重组骨形态发生蛋白-2加ADSCs)、常规诱导组(地塞米松加抗坏血酸加甘油磷酸钠加ADSCs)及非诱导组(空白诱导),第1、3、5、7、9、13、17和21天,倒置显微镜观察,茜素红及Von Kossa染色,测定增殖、Ⅰ型胶原及骨钙素(OC)含量。对各组间差异进行单因素方差分析和最小显著差异t检验,SPSS 11.0统计软件进行统计学分析。
结果与其他组相比,联合诱导组细胞体积明显增大,胞浆中的细胞器发达,细胞生长旺盛、细胞外基质矿化结节丰富,呈集落状层叠分布;矿化结节出现时间及分布规律:联合诱导组>成骨因子组>常规组>非诱导组;ALP表达时效及强度情况:联合诱导组>成骨因子组>常规组>非诱导组;此外,第13天时联合诱导组增殖活力、Ⅰ型胶原分别为(0.82 ± 0.19)AU、(79.82 ± 1.36)μg/ml,第17天时OC含量为(78.51 ± 4.32)μg/ml],均高于其它组,差异有统计学意义(P < 0.05)。
结论PRP联合rhBMP-2能通过协同机制,发挥强化ADSCs诱导成骨效应,为一种可行的优化成骨诱导方法。