【摘 要】
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目的探讨二氮嗪对H2O2诱导的软骨细胞凋亡的机制研究。方法每组取3只SD大鼠膝关节软骨细胞进行原代培养,将软骨细胞分成6组,分别为对照组（A组）,H2O2损伤组（B组）,H2O2+100μmol/L
【机 构】
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温州医科大学附属第二医院育英儿童医院骨科; 海南医学院第一附属医院创伤外科中心;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81460339);国际合作专项(GJXM201102);海南省卫生厅项目(琼卫2014重点-06号);海南省卫生厅项目(琼卫2013重点-06号);海南省科技厅项目(SF201416);浙江省卫生厅项目(2009B-107);海南省重点科技计划项目(ZDXM-20110051)
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目的探讨二氮嗪对H2O2诱导的软骨细胞凋亡的机制研究。方法每组取3只SD大鼠膝关节软骨细胞进行原代培养,将软骨细胞分成6组,分别为对照组（A组）,H2O2损伤组（B组）,H2O2+100μmol/L二氮嗪组（C组）,H2O2+200μmol/L二氮嗪组（D组）,H2O2+300μmol/L二氮嗪组（E组）,H2O2+400μmol/L二氮嗪组（F组）。A组细胞不做特殊处理,B组用400μmol/L双氧水在37℃恒温箱内孵育8 h,C、D、E、F组分别用100、200、300、400μmol/L的二氮嗪在37℃的恒温箱内预处理30 min,再用400μmol/L的H2O2孵育8 h,用CCK8法检测各组软骨细胞的活性,用流式细胞仪检测各组软骨细胞凋亡情况,用Rt PCR检测软骨细胞功能情况,用免疫荧光、Western Blot检测凋亡和内质网应激相关蛋白的表达情况。结果 （1）CCK8法检测各组细胞的活性率从大至小依次为A组>E组>D组>F组>B组;（2）流式细胞仪检测各组软骨细胞凋亡率由大至小依次为B组>F组>D组>E组>A组;（3）Rt PCR检测软骨细胞二型胶原蛋白（Coll-Ⅱ）、Caspase-3和聚集蛋白聚糖酶（aggrecanase）表达量,表达量大至小依次为A组>E组>D组>F组>B组;各组聚集蛋白聚糖酶表达量大至小依次为B组>F组>D组>E组>A组;（4）免疫荧光检测软骨细胞中CHOP蛋白的表达量,各组表达量依次是B组>F组>A组;（5）Western bolt检测各组软骨细胞中Caspase-3、Bax、CHOP蛋白的表达情况,表达量依次为B组>F组>A组。结论二氮嗪通过抑制内质网应激作用,从而减少H2O2诱导的大鼠软骨细胞的凋亡。
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