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摘 要：目的：探究在头孢曲松钠无菌检查中，怎样进行酶的选用。方法：选取两种具有代表性的青霉素酶以及头孢菌素酶来针对头孢曲松钠无菌检查进行实验研究，测定出具有专属性质的酶。结果：利用头孢菌素酶可以有效的将减少在进行头孢曲松钠无菌检验的过程中，需要进行冲洗的次数以及冲洗液的应用量。结论：在头孢曲松钠无菌检查中，合理的选用具有专属性质的酶，可以使得无菌检查的效率得到有效的提升。
关键词：头孢曲松钠；无菌检查；酶；选择
所谓的头孢曲松钠其实就是一种广谱型的抗生素，其属于β-内酰胺类别。针对β-内酰胺酶来说，有着稳定的效用。在针对头孢曲松钠进行无菌检查的过程中，由于其可以有效的抵抗肠杆菌科细菌的活性，并且其有着较强的β-内酰胺酶稳定性，所以，在进行无菌检查的过程中，可选用的酶种类主要为青霉素酶以及头孢菌素酶两种，并且还需要选用具有抑菌性质的中和剂来对这两种酶进行实验研究。严格的进行人工阳性菌的接种实验，并做出不同的7组实验，在对比这7组实验结果的基础上，可以得出大肠埃希菌的敏感性最为突出，而且就这两种酶进行实验研究可以得出，头孢菌素酶在无菌检查中进行应用，不需要应用到较多的冲洗液，并能够使得工作的效率大大的提升，有着更大的应用价值。
1材料
1.1仪器
hty-2000B智能集菌仪、全封闭式集菌培养器b-nkf301（杭州高得泰林生物技术设备有限公司，批号：20091215）。
1.2菌种
金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单孢菌、生孢梭菌、大肠埃希菌、白色念珠菌及黑曲霉（均为中国药品生物制品检定所）。
1.3培养基
硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、改良马丁琼脂培养基、蛋白胨、ph7.0氯化钠蛋白胨缓冲液（北京三药科技开发公司）。
1.4样品
头孢曲松钠原料（珠海联邦制药股份有限公司，批号：305001001、305001002、305001003）。
1.5β-内酰胺酶
青霉素酶（大于300万单位/ml，规格：2ml/支，中国药品生物制品检定所，批号：20090310）。头孢菌素酶（规格：200万单位/支，杭州北望生物技术有限公司，批号：091103）。
2、方法与结果
2.1菌液制备
接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单孢菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基内；接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基内，在30～35℃培养18～24h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基内，在23～28℃培养24～48h，上述培养物用氯化钠注射液制成含菌数小于100cfu/ml的菌悬液；接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，23～28℃培养5～7d，加入3～5ml氯化钠注射液，将孢子洗脱。洗脱液用氯化钠注射液制成含孢子数小于100cfu/ml的孢子悬液。
2.2菌液含菌量的計数
取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单孢菌的相应稀释级别的菌液各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48h，计数。取白色念珠菌、黑曲霉的相应稀释级别的菌液各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23～28℃培养72h，计数。取生孢梭菌的相应稀释级别的菌液各1ml，分别注入装有50ml硫乙醇酸盐流体培养基的试管中（勿振荡试管），每株试验菌平行制备2个试管，置30～35℃培养24～48h，计数。菌液制备及计数结果见表1。
2.3验证实验
2.3.1制备供试液
先取用10g的供试品，然后应用PH值为中性的氯化钠蛋白胨缓进行溶液的配置，配置出的溶液量需要控制为500ml，在配置完成后，留作备用，然后展开平行试验。
2.3.2阳性对照
选用另外一个相同的培养皿注入相同体积的培养基，然后在筒中进行相同量的实验菌的加入，所选用的实验菌为大肠埃希菌。
2.3.3操作步骤
将规定量的供试品按薄膜过滤法滤过，冲洗，冲洗液分别为900、1200、1500ml（采用全封闭式3联集菌培养器，培养基灌入滤筒后，每筒分别加入1、2、3支青霉素酶（大于300万单位/ml，2ml/支）和1、2、3支头孢菌素酶，最后逐一加入稀释好的试验菌，分别观察，结果见表2。
2.4青霉素酶
在冲洗量为1500ml，加入3支青霉素酶时，其敏感菌大肠埃希菌在48h就能生长良好。
2.5头孢菌素酶
在冲洗量为900ml，只要加入2支头孢菌素酶时，其敏感菌大肠埃希菌在48h才能生长良好。
3、讨论
就本文的实验可知，头孢曲松钠不会与β-内酰胺酶形成反应，两者接触较为稳定，然而，在β-内酰胺酶却会使得阳性菌在生长状况上出现一定的改进，使得阳性菌对抑菌作用不会受到影响。就对比的结果来看，相较于青霉素酶来说，头孢菌素酶在对头孢曲松钠进行降解处理的时候，效果会更加的明显，同时还可以有效的提升检验的效率。
总的来说，在对头孢曲松钠的抑菌性进行中和降解处理的过程中，合理的应用头孢菌素酶，能够使得大肠埃希菌这种具有较强的敏感性的细菌不会受到较多的冲洗，可以正常的进行生长。
参考文献：
[1]乐正永.无菌检查方法验证资料分析[J].中国现代药物应用.2013（23）
[2]黄明，别小琳.无菌检查方法的改进及意义研究[J].四川生理科学杂志.2011（02）
[3]钱生稳，戴红娟，钱春红.注射用唑来膦酸无菌检查法方法学研究[J].海峡药学.2014（07）
[4]国家药典委员会编.中华人民共和国药典[M].化学工业出版社，2015
关键词：头孢曲松钠；无菌检查；酶；选择
所谓的头孢曲松钠其实就是一种广谱型的抗生素，其属于β-内酰胺类别。针对β-内酰胺酶来说，有着稳定的效用。在针对头孢曲松钠进行无菌检查的过程中，由于其可以有效的抵抗肠杆菌科细菌的活性，并且其有着较强的β-内酰胺酶稳定性，所以，在进行无菌检查的过程中，可选用的酶种类主要为青霉素酶以及头孢菌素酶两种，并且还需要选用具有抑菌性质的中和剂来对这两种酶进行实验研究。严格的进行人工阳性菌的接种实验，并做出不同的7组实验，在对比这7组实验结果的基础上，可以得出大肠埃希菌的敏感性最为突出，而且就这两种酶进行实验研究可以得出，头孢菌素酶在无菌检查中进行应用，不需要应用到较多的冲洗液，并能够使得工作的效率大大的提升，有着更大的应用价值。
1材料
1.1仪器
hty-2000B智能集菌仪、全封闭式集菌培养器b-nkf301（杭州高得泰林生物技术设备有限公司，批号：20091215）。
1.2菌种
金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单孢菌、生孢梭菌、大肠埃希菌、白色念珠菌及黑曲霉（均为中国药品生物制品检定所）。
1.3培养基
硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、改良马丁琼脂培养基、蛋白胨、ph7.0氯化钠蛋白胨缓冲液（北京三药科技开发公司）。
1.4样品
头孢曲松钠原料（珠海联邦制药股份有限公司，批号：305001001、305001002、305001003）。
1.5β-内酰胺酶
青霉素酶（大于300万单位/ml，规格：2ml/支，中国药品生物制品检定所，批号：20090310）。头孢菌素酶（规格：200万单位/支，杭州北望生物技术有限公司，批号：091103）。
2、方法与结果
2.1菌液制备
接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单孢菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基内；接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基内，在30～35℃培养18～24h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基内，在23～28℃培养24～48h，上述培养物用氯化钠注射液制成含菌数小于100cfu/ml的菌悬液；接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，23～28℃培养5～7d，加入3～5ml氯化钠注射液，将孢子洗脱。洗脱液用氯化钠注射液制成含孢子数小于100cfu/ml的孢子悬液。
2.2菌液含菌量的計数
取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单孢菌的相应稀释级别的菌液各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48h，计数。取白色念珠菌、黑曲霉的相应稀释级别的菌液各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23～28℃培养72h，计数。取生孢梭菌的相应稀释级别的菌液各1ml，分别注入装有50ml硫乙醇酸盐流体培养基的试管中（勿振荡试管），每株试验菌平行制备2个试管，置30～35℃培养24～48h，计数。菌液制备及计数结果见表1。
2.3验证实验
2.3.1制备供试液
先取用10g的供试品，然后应用PH值为中性的氯化钠蛋白胨缓进行溶液的配置，配置出的溶液量需要控制为500ml，在配置完成后，留作备用，然后展开平行试验。
2.3.2阳性对照
选用另外一个相同的培养皿注入相同体积的培养基，然后在筒中进行相同量的实验菌的加入，所选用的实验菌为大肠埃希菌。
2.3.3操作步骤
将规定量的供试品按薄膜过滤法滤过，冲洗，冲洗液分别为900、1200、1500ml（采用全封闭式3联集菌培养器，培养基灌入滤筒后，每筒分别加入1、2、3支青霉素酶（大于300万单位/ml，2ml/支）和1、2、3支头孢菌素酶，最后逐一加入稀释好的试验菌，分别观察，结果见表2。
2.4青霉素酶
在冲洗量为1500ml，加入3支青霉素酶时，其敏感菌大肠埃希菌在48h就能生长良好。
2.5头孢菌素酶
在冲洗量为900ml，只要加入2支头孢菌素酶时，其敏感菌大肠埃希菌在48h才能生长良好。
3、讨论
就本文的实验可知，头孢曲松钠不会与β-内酰胺酶形成反应，两者接触较为稳定，然而，在β-内酰胺酶却会使得阳性菌在生长状况上出现一定的改进，使得阳性菌对抑菌作用不会受到影响。就对比的结果来看，相较于青霉素酶来说，头孢菌素酶在对头孢曲松钠进行降解处理的时候，效果会更加的明显，同时还可以有效的提升检验的效率。
总的来说，在对头孢曲松钠的抑菌性进行中和降解处理的过程中，合理的应用头孢菌素酶，能够使得大肠埃希菌这种具有较强的敏感性的细菌不会受到较多的冲洗，可以正常的进行生长。
参考文献：
[1]乐正永.无菌检查方法验证资料分析[J].中国现代药物应用.2013（23）
[2]黄明，别小琳.无菌检查方法的改进及意义研究[J].四川生理科学杂志.2011（02）
[3]钱生稳，戴红娟，钱春红.注射用唑来膦酸无菌检查法方法学研究[J].海峡药学.2014（07）
[4]国家药典委员会编.中华人民共和国药典[M].化学工业出版社，2015