【摘 要】
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组织基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)抑制肿瘤迁移及侵袭.文中以人TIMP-2为研究对象,探索人TIMP-2蛋白的原核表达特征,并进行纯化及活性鉴定.以人肺癌A549细胞的总RNA反转录
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院放射医学研究所天津市放射医学与分子核医学重点实验室,天津300192
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组织基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)抑制肿瘤迁移及侵袭.文中以人TIMP-2为研究对象,探索人TIMP-2蛋白的原核表达特征,并进行纯化及活性鉴定.以人肺癌A549细胞的总RNA反转录得到的cDNA为模板,克隆人TIMP-2基因,构建pET28a重组表达载体;经酶切检测和测序分析的重组表达载体pET28a-TIMP-2转入大肠杆菌EscherichiacoliBL21(DE3)中,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并对表达条件进行优化.经镍亲和柱纯化后,用Western blotting法鉴定融合蛋白His-TIMP-2,并用明胶酶谱法检测融合蛋白的活性.研究发现融合蛋白His-TIMP-2在E.coliBL21(DE3)中以包涵体的形式存在;在一定范围内,IPTG浓度对His-TIMP-2的表达量没有显著影响;而在该表达系统中,诱导温度和时间是关键参数,His-TIMP-2的表达量随诱导温度升高而增加;纯化并复性后的融合蛋白His-TIMP-2能有效抑制人肺癌A549细胞表达的基质金属蛋白酶的活性.具有活性的融合蛋白的获得为后续深入研究人TIMP-2的功能及机制奠定基础,并对肿瘤治疗具有重要意义.
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