克隆嗜热枯草芽孢杆菌WY-34普鲁兰酶基因并在大肠杆菌中进行表达,对重组酶进行纯化和酶学性质研究,根据枯草芽孢杆菌的普鲁兰酶蛋白序列,设计PCR引物对WY-34的普鲁兰酶基因进行克隆及异源表达。对表达蛋白的最适pH、pH稳定性及最适温度、温度稳定性等特性进行研究,并测定重组普鲁兰酶的底物特异性。将普鲁兰酶基因pluA克隆及分析序列后,发现基因长度为2.2 kb,编码718个氨基酸,在大肠杆菌中异源表达。通过Ni-IDA亲和层析一步纯化得到比活力为93.2 U/mg的纯酶,SDS-PAGE和凝胶层析测定的分子量分别为76.2 kD和74.3 kD。酶学性质研究表明,该酶的最适温度为40°C,在温度不高于45°C条件下稳定;最适pH为6.0,同一温度下pH 6.0-9.0范围内处理30 min可以保持80%以上的酶活力,此酶对普鲁兰糖有很强的底物特异性。此重组普鲁兰酶的酶学性质表明此酶具有一定的工业化应用价值。