【摘 要】
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目的:获得抗人红细胞单链抗体(single-chain antibody, ScFv)基因,并在大肠杆菌中表达具有能与人红细胞特异性结合的ScFv.方法:以从分泌抗人红细胞单克隆抗体细胞株中提取细
【机 构】
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军事医学科学院微生物学流行病学研究所
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目的:获得抗人红细胞单链抗体(single-chain antibody, ScFv)基因,并在大肠杆菌中表达具有能与人红细胞特异性结合的ScFv.方法:以从分泌抗人红细胞单克隆抗体细胞株中提取细胞的总RNA为模板,利用扩增鼠源性抗体可变区基因的通用引物,通过RT-PCR分别获得轻链(VL)、重链(VH)可变区基因,并通过15个氨基酸的连接肽(Gly4Ser)3按VL-接头-VH的顺序连接起来,组建成ScFv基因.结果:核苷酸序列分析证明,获得的单链抗体基因VH基因属于小鼠抗体重链可变区基因家族的V(A)组,VL基因属于小鼠抗体κ轻链可变区基因家族的IV组.与pGEX-5X-3表达载体上的GST融合蛋白表达后,在相对分子质量54?000处有一明显的空载体对照没有的蛋白带(ScFv 28000, GST26000).间接免疫荧光证明该表达产物能与人红细胞特异性结合.结论:获得了抗人红细胞ScFv基因和具有抗体活性的抗人红细胞ScFv,为建立患者自身红细胞凝集试验奠定了基础.
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