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重庆泰濠制药有限公司
【摘 要】用气相色谱对泊马度胺原料药中N，N-二甲基甲酰胺、乙酸、四氢呋喃、甲醇、乙醇、1，4-二氧六环残留溶剂分析方法进行开发，采用气相色谱仪氢火焰离子化检测器、色谱柱：DB-WAX（30-m×0.32-mm），膜厚0.5μm 按内标法检测N，N-二甲基甲酰胺等残留溶剂的含量。结果：6个溶剂的分离度都大于2.0，线性范围为6个残留溶剂的定量限至ICH限度值120% ，r最小为0.99912，回收率为95.9～102.9%，检出限最大40.1ppm，精密度RSD最大4.6%。结论：该方法准确、灵敏、快速、精密度高，适用于泊马度胺6个残留溶剂的检测，同时符合ICH要求。
【关键词】泊马度胺；气相色谱；N，N-二甲基甲酰胺；乙酸
泊马度胺由美国赛尔基因（Celgens）公司研发一种新型免疫调节剂，2013年2月通过FDA批准上市，用于治疗复发性及难治性多发性股市瘤。
在合成工艺中用到溶剂N，N-二甲基甲酰胺、乙酸、四氢呋喃、甲醇、乙醇、1，4-二氧六环，因此需要按照ICH指南，控制产品中使用的残留溶剂限度。鉴于该产品理化性质原因，在水和醇类等很多溶剂的溶解性差，在N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜有一定的溶解性，我们采用二甲亚砜做溶剂，同时N，N-二甲基甲酰胺高沸点溶剂，乙酸的灵敏度低，如果采用頂空进样，检出限不能满足要求，因此我们采用自动进样器液体进样方式进样，提高了灵敏度，同时加入内标正丙醇，保证了方法的准确度和精密度。
1.仪器与试剂
表1 仪器
仪器名称 型号 供应商
电子天平 CP225D 赛多利斯
气相色谱仪 Agilent 6890N 安捷伦
Agilent 7890A 安捷伦
色谱柱 DB-WAX（ 30-m×0.32-mm），膜厚0.5μm 安捷伦
表2 试剂
名称 规格
四氢呋喃 AR
甲醇 AR
乙醇 AR
1，4-二氧六环 AR
N，N-二甲基甲酰胺 HPLC
乙酸 AR
正丙醇 AR
二甲亚砜 HPLC
2.试验过程与结果
2.1色谱条件
色谱柱： DB-WAX（ 30-m×0.32-mm），膜厚0.5μm
柱温：
保持9min 30℃/min 保持3min 30℃/min 保持5min
40℃——→40℃——→70℃——→70℃——→150℃——→
60℃/min 保持6min
150℃——→220℃——→220℃
气化室温度：220℃ FID检测器温度：260℃
载气：N2 ；载气流速：1.0ml/min；进样量：1μl；分流比：20：1
2.2 溶液的配制
2.2.1 空白：二甲亚砜。
2.2.2 内标贮备溶液的配制：取正丙醇约0.5g，置100mL量瓶中，加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀。
2.2.3 对照贮备溶液的配制：取四氢呋喃约0.072g，甲醇约0.3g，乙醇约0.5g，1，4-二氧六环约0.038g，N，N-二甲基甲酰胺约0.088g，乙酸约0.5g，精密称定，置同一100mL量瓶中，加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀。
对照溶液的配制：吸取0.5ml对照贮备溶液于5ml容量瓶中，加入0.5ml内标贮备溶液，用二甲亚砜稀释至刻度摇匀；（四氢呋喃约为72μg/ml，甲醇约为300μg/ml，乙醇约为500μg/ml，1，4-二氧六环约为38μg/ml，N，N-二甲基甲酰胺约为88μg/ml，乙酸约为500μg/ml）供试品溶液的配制：取供试品约0.5g，精密称定，置5ml容量瓶中，加入0.5ml内标贮备溶液，用二甲亚砜稀释至刻度摇匀。
2.3系统适用性与专属性试验
将空白、对照溶液按测定方法，分别注入色谱仪，记录色谱图，空白对待测溶剂峰无干扰，从表3可见，通过系统适用性试验，各溶剂峰分离度最小为6.14，表明该方法专属性强，对照溶液分离度图谱见图1。
表3 对照溶液分离度
峰序号 溶剂名称 保留时间（min） 相邻溶剂间分离度
1 四氢呋喃 5.382 ——
2 甲醇 6.341 10.25
3 乙醇 7.622 11.80
4 正丙醇 11.059 32.72
5 1，4-二氧六环 11.668 6.14
6 N，N-二甲基甲酰胺 16.944 54.11
7 乙酸 18.875 25.57
2.4样品检测与重复性
重复称取7份样品，检测残留溶剂，测得乙醇为1051ppm，N，N-二甲基甲酰胺为182ppm，其他溶剂均未检出，均符合ICH限度要求，测得RSD最大为4.60%，可见该方法精密度好 ，对样品中的残留溶剂有较好的检测指示能力。
2.5 线性与范围
根据有机挥发性残留溶剂规定的定量限至限度值120%配制溶液，测得的线性相关系数r最小为0.99912，可见该检测方法在规定的浓度范围内有较好的线性。
2.6检出限
根据S/N=3±1时为检测限，在供试品中四氢呋喃的检测限为10.8ppm，甲醇的检测限为19.3 ppm，乙醇的检测限为20.0 ppm，1，4-二氧六环的检测限为19.6 ppm，N，N-二甲基甲酰胺的检测限为31.1 ppm，乙酸的检测限为40.1ppm。
2.7 准确度
通过在已知准确浓度的样品中加入各溶剂规定限值的80%、100%、120%浓度的溶剂，测得的回收率为95.9～102.9%，可见该方法准确度好。
3. 讨论
ICH 3C明确规定药品用到的残留溶剂必须质量控制，该产品用到ICH II类和III类溶剂，本方法都对用到的残留溶剂进行了检测，而且符合ICH限度要求，采用二甲亚砜为稀释液解决了该产品溶解性不好的问题，从2.6项下可见，残留溶剂检出限最大为40.1ppm，方法灵敏度高，回收率均在90-110%之间，说明本方法准确，在待测溶剂定量限至限度的120%范围内线性相关系数为最小0.99912，表明呈良好的线性，因此本方法适用于泊马度胺原料药的残留溶剂检测。
参考文献：
[1]《药品生产质量管理规范》（2010年修订）.
[2]《中国药典》2015版9101药品质量标准分析方法验证指导原则.
[3]USP（1225）（Validation of Compendial Methods）.
[4]ICH出版的ICHQ2A、ICHQ2B.
【摘 要】用气相色谱对泊马度胺原料药中N，N-二甲基甲酰胺、乙酸、四氢呋喃、甲醇、乙醇、1，4-二氧六环残留溶剂分析方法进行开发，采用气相色谱仪氢火焰离子化检测器、色谱柱：DB-WAX（30-m×0.32-mm），膜厚0.5μm 按内标法检测N，N-二甲基甲酰胺等残留溶剂的含量。结果：6个溶剂的分离度都大于2.0，线性范围为6个残留溶剂的定量限至ICH限度值120% ，r最小为0.99912，回收率为95.9～102.9%，检出限最大40.1ppm，精密度RSD最大4.6%。结论：该方法准确、灵敏、快速、精密度高，适用于泊马度胺6个残留溶剂的检测，同时符合ICH要求。
【关键词】泊马度胺；气相色谱；N，N-二甲基甲酰胺；乙酸
泊马度胺由美国赛尔基因（Celgens）公司研发一种新型免疫调节剂，2013年2月通过FDA批准上市，用于治疗复发性及难治性多发性股市瘤。
在合成工艺中用到溶剂N，N-二甲基甲酰胺、乙酸、四氢呋喃、甲醇、乙醇、1，4-二氧六环，因此需要按照ICH指南，控制产品中使用的残留溶剂限度。鉴于该产品理化性质原因，在水和醇类等很多溶剂的溶解性差，在N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜有一定的溶解性，我们采用二甲亚砜做溶剂，同时N，N-二甲基甲酰胺高沸点溶剂，乙酸的灵敏度低，如果采用頂空进样，检出限不能满足要求，因此我们采用自动进样器液体进样方式进样，提高了灵敏度，同时加入内标正丙醇，保证了方法的准确度和精密度。
1.仪器与试剂
表1 仪器
仪器名称 型号 供应商
电子天平 CP225D 赛多利斯
气相色谱仪 Agilent 6890N 安捷伦
Agilent 7890A 安捷伦
色谱柱 DB-WAX（ 30-m×0.32-mm），膜厚0.5μm 安捷伦
表2 试剂
名称 规格
四氢呋喃 AR
甲醇 AR
乙醇 AR
1，4-二氧六环 AR
N，N-二甲基甲酰胺 HPLC
乙酸 AR
正丙醇 AR
二甲亚砜 HPLC
2.试验过程与结果
2.1色谱条件
色谱柱： DB-WAX（ 30-m×0.32-mm），膜厚0.5μm
柱温：
保持9min 30℃/min 保持3min 30℃/min 保持5min
40℃——→40℃——→70℃——→70℃——→150℃——→
60℃/min 保持6min
150℃——→220℃——→220℃
气化室温度：220℃ FID检测器温度：260℃
载气：N2 ；载气流速：1.0ml/min；进样量：1μl；分流比：20：1
2.2 溶液的配制
2.2.1 空白：二甲亚砜。
2.2.2 内标贮备溶液的配制：取正丙醇约0.5g，置100mL量瓶中，加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀。
2.2.3 对照贮备溶液的配制：取四氢呋喃约0.072g，甲醇约0.3g，乙醇约0.5g，1，4-二氧六环约0.038g，N，N-二甲基甲酰胺约0.088g，乙酸约0.5g，精密称定，置同一100mL量瓶中，加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀。
对照溶液的配制：吸取0.5ml对照贮备溶液于5ml容量瓶中，加入0.5ml内标贮备溶液，用二甲亚砜稀释至刻度摇匀；（四氢呋喃约为72μg/ml，甲醇约为300μg/ml，乙醇约为500μg/ml，1，4-二氧六环约为38μg/ml，N，N-二甲基甲酰胺约为88μg/ml，乙酸约为500μg/ml）供试品溶液的配制：取供试品约0.5g，精密称定，置5ml容量瓶中，加入0.5ml内标贮备溶液，用二甲亚砜稀释至刻度摇匀。
2.3系统适用性与专属性试验
将空白、对照溶液按测定方法，分别注入色谱仪，记录色谱图，空白对待测溶剂峰无干扰，从表3可见，通过系统适用性试验，各溶剂峰分离度最小为6.14，表明该方法专属性强，对照溶液分离度图谱见图1。
表3 对照溶液分离度
峰序号 溶剂名称 保留时间（min） 相邻溶剂间分离度
1 四氢呋喃 5.382 ——
2 甲醇 6.341 10.25
3 乙醇 7.622 11.80
4 正丙醇 11.059 32.72
5 1，4-二氧六环 11.668 6.14
6 N，N-二甲基甲酰胺 16.944 54.11
7 乙酸 18.875 25.57
2.4样品检测与重复性
重复称取7份样品，检测残留溶剂，测得乙醇为1051ppm，N，N-二甲基甲酰胺为182ppm，其他溶剂均未检出，均符合ICH限度要求，测得RSD最大为4.60%，可见该方法精密度好 ，对样品中的残留溶剂有较好的检测指示能力。
2.5 线性与范围
根据有机挥发性残留溶剂规定的定量限至限度值120%配制溶液，测得的线性相关系数r最小为0.99912，可见该检测方法在规定的浓度范围内有较好的线性。
2.6检出限
根据S/N=3±1时为检测限，在供试品中四氢呋喃的检测限为10.8ppm，甲醇的检测限为19.3 ppm，乙醇的检测限为20.0 ppm，1，4-二氧六环的检测限为19.6 ppm，N，N-二甲基甲酰胺的检测限为31.1 ppm，乙酸的检测限为40.1ppm。
2.7 准确度
通过在已知准确浓度的样品中加入各溶剂规定限值的80%、100%、120%浓度的溶剂，测得的回收率为95.9～102.9%，可见该方法准确度好。
3. 讨论
ICH 3C明确规定药品用到的残留溶剂必须质量控制，该产品用到ICH II类和III类溶剂，本方法都对用到的残留溶剂进行了检测，而且符合ICH限度要求，采用二甲亚砜为稀释液解决了该产品溶解性不好的问题，从2.6项下可见，残留溶剂检出限最大为40.1ppm，方法灵敏度高，回收率均在90-110%之间，说明本方法准确，在待测溶剂定量限至限度的120%范围内线性相关系数为最小0.99912，表明呈良好的线性，因此本方法适用于泊马度胺原料药的残留溶剂检测。
参考文献：
[1]《药品生产质量管理规范》（2010年修订）.
[2]《中国药典》2015版9101药品质量标准分析方法验证指导原则.
[3]USP（1225）（Validation of Compendial Methods）.
[4]ICH出版的ICHQ2A、ICHQ2B.