尿嘧啶DNA糖苷酶活性的电泳凝胶成像分析测定

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尿嘧啶DNA糖苷酶(UNG)是防止PCR似阳性反应的工具酶,参照限制性DNA内切酶活力测定法的原理(以完全消化DNA带型的最高稀释度为一个活性单位)和应用凝胶成像分析技术,建立了UNG酶活性的非同位素检测新方法,反应体积为20μL,底物dU-ung(dU-DNA)为165μg,加UNG后在适当温度下反应10min,使底物去除尿嘧啶,其AP位点经碱降解.通过琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像分析。测定底物dU-ung的残留量以测定UNG酶活性.酶活力以37℃每分钟降解1ng dU-ung的酶量为一个单位,检测灵敏度为
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