【摘 要】
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花青素合成酶（anthocyanidin synthase， ANS）是花青素合成途径下游的关键酶之一，负责将花青素由无色的催化成为有色的。为初步探究ANS基因在多肉植物墨法师（Aeonium arboreum ‘Zwartkop’）花青素生物合成中的作用，本试验以墨法师叶片为材料，采用PCR克隆了ANS1基因的全长序列，并进行了生物信息学分析及植物超量表达载体的构建。结果显示，克隆得到的墨法师A
【基金项目】
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宿迁市科技计划（K202018）； 宿迁市科技计划（M202001）； 宿迁学院创新团队项目（2021td05）共同资助；
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花青素合成酶（anthocyanidin synthase， ANS）是花青素合成途径下游的关键酶之一，负责将花青素由无色的催化成为有色的。为初步探究ANS基因在多肉植物墨法师（Aeonium arboreum ‘Zwartkop’）花青素生物合成中的作用，本试验以墨法师叶片为材料，采用PCR克隆了ANS1基因的全长序列，并进行了生物信息学分析及植物超量表达载体的构建。结果显示，克隆得到的墨法师ANS1基因（GenBank登录号为OK315338）具有一个长为1 080 bp且完整的ORF，编码359个氨基酸；AaANS1蛋白相对分子量为40.41 kD，理论等电点5.45，化学分子式为C1825H2880N476O539S9，为脂溶性亲水蛋白，蛋白无序化比例较低，具31个氨基酸磷酸化位点；AaANS1蛋白具有PLN03178家族结构域，具备花青素合成酶的功能，其蛋白三级结构与拟南芥花青素合成酶最为相似；AaANS1蛋白亚细胞定位预测其定位于细胞质，属于跨膜蛋白；序列比对和进化树分析显示AaANS1蛋白具典型的2-酮戊二酸-Fe2+双加氧酶结构域，与苹果MdANS蛋白亲缘关系最近；重组质粒用BamHI和KpnI进行双酶切，获得两条带，分别约10 000 bp和1 100 bp，与预期的大小一致，显示AaANS1基因的编码序列已成功重组到植物表达载体pCAMBIA2300S上。该研究可为进一步探究多肉植物墨法师叶色形成的分子机理提供理论依据。
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