【摘 要】
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目的：研究胡柚黄酮对原代神经元氧糖剥夺和小鼠慢性脑缺血的保护作用及其机制。方法：分离胎龄18 d胎鼠的原代海马神经元，培养1周后分组分别加入0.25、 0.50和1.00 mg/mL胡柚黄酮，经氧糖剥夺处理1 h后，各组分别复灌6、24 h。运用鬼笔环肽着色镜下观察细胞骨架。6周龄ICR雄性小鼠随机分为手术对照组、模型对照组和胡柚黄酮小剂量（10 mg/kg）、中剂量（25 mg/kg）、大剂量（
【基金项目】
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国家级大学生创新创业训练计划（202113021022）； 教育部产学合作协同育人项目（202102242034）；
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目的：研究胡柚黄酮对原代神经元氧糖剥夺和小鼠慢性脑缺血的保护作用及其机制。方法：分离胎龄18 d胎鼠的原代海马神经元，培养1周后分组分别加入0.25、 0.50和1.00 mg/mL胡柚黄酮，经氧糖剥夺处理1 h后，各组分别复灌6、24 h。运用鬼笔环肽着色镜下观察细胞骨架。6周龄ICR雄性小鼠随机分为手术对照组、模型对照组和胡柚黄酮小剂量（10 mg/kg）、中剂量（25 mg/kg）、大剂量（50 mg/kg）组，每组20只。给药3周后，除手术对照组外，其余各组单侧颈总动脉结扎诱导小鼠慢性脑缺血，其中胡柚黄酮组术后再以胡柚黄酮干预4周。采用旷场实验、新事物认知实验、莫里斯水迷宫实验评估小鼠的焦虑情绪和学习记忆能力；采用尼氏染色、苏木精-伊红染色、高尔基染色检测小鼠皮层、海马的神经元变性及树突棘变化；采用蛋白质印迹法检测小鼠海马Rho相关激酶（ROCK）2、 LIM激酶（LIMK）1、丝切蛋白及其磷酸化蛋白的表达水平和G-actin与F-actin蛋白的表达水平。结果：原代海马神经元氧糖剥夺后，细胞骨架出现断裂、缩短等结构异常，胡柚黄酮处理后可逆上述改变，尤以0.50 mg/mL组为佳。与手术对照组比较，模型对照组表现出焦虑和认知能力显著下降（均P＜0.01），而胡柚黄酮治疗可显著改善焦虑和认知功能障碍（均P＜0.05），其中胡柚黄酮中剂量组改善最为明显。病理结果显示，模型组小鼠海马和皮层尼氏小体和树突棘数减少（均P＜0.01）；经中剂量胡柚黄酮处理后，尼氏小体和树突棘数明显恢复（均P＜0.05）。与手术对照组比较，模型对照组脑组织ROCK2蛋白磷酸化水平显著升高（P＜0.05），而LIMK1蛋白和丝切蛋白磷酸化水平明显降低（P＜0.05）,G-actin/F-actin相对含量比值明显上升（P＜0.05）；胡柚黄酮给药后，各组脑组织ROCK2蛋白磷酸化水平显著降低（P＜0.05）,LIMK1蛋白和丝切蛋白磷酸化水平显著上调（P＜0.05）,G-actin/F-actin相对含量比值显著下降（P＜0.05）。结论：胡柚黄酮通过RhoA/ROCK信号通路保护缺血诱导的细胞骨架损伤，减少神经元树突棘损伤，最终保护小鼠抵抗慢性脑缺血。胡柚黄酮可能是慢性缺血治疗的潜在候选药物。
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