【摘 要】
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目的:研究骨骼肌细胞作为基因治疗靶细胞,其合成、加工和分泌外源性蛋白质的功能.方法:应用骨骼肌细胞特异性和非特异性表达载体(pdLMe4bAhⅨm和LⅨSN)转染联合免疫缺陷(SCID
【机 构】
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第二军医大学长海医院血液内科,美国密歇根大学人类遗传系
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目的:研究骨骼肌细胞作为基因治疗靶细胞,其合成、加工和分泌外源性蛋白质的功能.方法:应用骨骼肌细胞特异性和非特异性表达载体(pdLMe4bAhⅨm和LⅨSN)转染联合免疫缺陷(SCID)小鼠原代成肌细胞(SCID-MB)和C2C12成肌细胞系,观察这两种细胞在合成、加工和分泌人凝血因子Ⅸ(FⅨ)蛋白质方面的异同.结果:在SCID-MB中,pdLMe4bAhⅨm可表达的FⅨ达2 000ng.10-6.(24 h)-1,凝血活性达95%～103%.比较细胞内和培养上清液中的FⅨ蛋白及细胞内FⅨ mRNA丰度变化表明,C2C12细胞分泌FⅨ的功能不如SCID-MB,而合成、加工FⅨ的能力与SCID-MB相似.结论:原代小鼠骨骼肌细胞可高效表达、加工和分泌外源性基因产物;在以骨骼肌细胞作为靶细胞进行基因治疗研究时,应尽量应用原代细胞.本研究为临床应用骨骼肌细胞作为基因治疗靶细胞奠定了实验基础.
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