【摘 要】
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目的 制备抗H5N1禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）M1蛋白全人源胞内抗体TAT-ScFv M1-mFc，并进行纯化。方法 从pET28（a）-TAT-ScFv M1质粒中通过PCR扩增目的基因片段TAT-ScFv M1，将该片段与表达载体pET32（a）-HisTag-Sumo-mFc连接，构建重组表达质粒pET32（a）-HisTag-Sumo-TAT-ScFv
【基金项目】
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吉林省重点研发计划（20200404113YY）； 军队后勤项目（2019SWAQ05-6-8）；
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目的 制备抗H5N1禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）M1蛋白全人源胞内抗体TAT-ScFv M1-mFc，并进行纯化。方法 从pET28（a）-TAT-ScFv M1质粒中通过PCR扩增目的基因片段TAT-ScFv M1，将该片段与表达载体pET32（a）-HisTag-Sumo-mFc连接，构建重组表达质粒pET32（a）-HisTag-Sumo-TAT-ScFv M1-mFc，转化大肠埃希菌BL21（DE3）中，IPTG诱导表达目的蛋白。通过金属螯合层析、Sumo酶切及亲和层析等方法对目的蛋白进行纯化，ELISA法检测抗体的亲和活性。结果 重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确。重组蛋白以包涵体形式表达，相对分子质量约80 000。制备的胞内抗体具有明显结合M1蛋白的活性。结论 获得了具有亲和活性的抗H5N1AIV M1蛋白的全人源胞内抗体蛋白TAT-ScFv M1-mFc，为进一步开发针对AIV H5N1的抗体药物奠定了基础。
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