【摘 要】
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目的 构建口服幽门螺杆菌多价表位疫苗CTB-HapA-UreA-UreB-CagA（CTB-HUUC），并初步研究其在BABL/c小鼠体内的免疫治疗效果。方法 文献查找幽门螺杆菌相关抗原的显性表位序列Hpa
【机 构】
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湖北医药学院附属人民医院血液内科,湖北医药学院生物科学系,湖北医药学院药理学教研室,十堰市太和医院感染与免疫性疾病研究所（湖北医药学院附属医院）
【基金项目】
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湖北省卫生和计划生育委员会项目(No:WJ2017F075);十堰市科学技术研究与开发项目(No:16Y11)
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目的 构建口服幽门螺杆菌多价表位疫苗CTB-HapA-UreA-UreB-CagA（CTB-HUUC），并初步研究其在BABL/c小鼠体内的免疫治疗效果。方法 文献查找幽门螺杆菌相关抗原的显性表位序列HpaA88-100、HpaA132-141、UreA27-53、UreA183-203、UreB229-251、UreB317-329、UreB321-339、UreB373-385、UreB438-452、UreB546-561、CagA149-164、CagA196-217，通过Linker将其串联，并在N端引入分子内佐剂CTB序列，构建重组质粒pET28a(+)/ctB-hpaA-ureA-ureB-cagA〔pET28a(+)/ctB-HUUC〕。再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中，IPTG进行诱导表达、层析纯化，获得高纯度的CTB-HUUC重组蛋白，并采用Western Blot对其进行鉴定。GM1-ELISA检测重组蛋白CTB-HUUC体外结合GM1的能力。6周龄BABL/c小鼠，感染幽门螺杆菌1次/d，连续感染4次；末次感染后4周，灌胃CTB-HUUC重组蛋白200 μg/次， 1次/周，连续免疫4次。末次免疫后2周，处死小鼠，取小鼠胃组织进行幽门螺杆菌培养计数。结果 成功获得高纯度的CTB-HUUC重组蛋白，Western blot检测CTB-HUUC可与抗幽门螺杆菌悉尼株（SS1株）小鼠血清及鼠抗CTB单抗产生特异性反应。GM1-ELISA检测重组蛋白CTB-HUUC体外可结合GM1，具有良好的佐剂活性。CTB-HUUC组小鼠胃组织进行幽门螺杆菌培养计数结果为6.14×103 CFU/g 、 CTB 组为5.72×106 CFU/g、PBS组为6.70×106 CFU/g。结论 口服幽门螺杆菌多价表位疫苗CTB-HUUC对感染幽门螺杆菌的BABL/c小鼠具有显著的治疗效果。
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