【摘 要】
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[目的]制备抗人甲状腺素多克隆抗体并应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)系统建立非均衡竞争FT4化学发光法.[方法]以T4-牛血清白蛋白(bovin serum albumin
【机 构】
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重庆医科大学检验医学院,重庆400016博奥赛斯(天津)生物科技有限公司,天津300162;重庆医科大学检验医学院,重庆,400016;博奥赛斯(天津)生物科技有限公司,天津,300162;
【基金项目】
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天津市科技型中小企业技术创新专项资金项目;
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[目的]制备抗人甲状腺素多克隆抗体并应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)系统建立非均衡竞争FT4化学发光法.[方法]以T4-牛血清白蛋白(bovin serum albumin,BSA)为抗原免疫新西兰兔,制备抗人T4多克隆抗体,亲和层析法吸附掉与3-碘-L-甲状腺原氨酸(3-iodo-L-tyrosine)、3,5-二碘-L-甲状腺原氨酸(3,5-diiodo-L-tyrosine)、D-三碘甲状腺原氨酸(D-T3)、L-三碘甲状腺原氨酸(L-T3)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)有交叉反应多抗,纯化特异性的抗人T4多克隆抗体并用FITC标记T4类似物,用抗FITC抗体包被微孔板.反应时,将FT4校准品或样品、FITC-T4类似物、T4抗体-HRP依次加入包被有抗FTTC抗体的化学发光板中,FITC -T4类似物与FT4校准品或样品,非均衡竞争结合T4抗体-HRP,从而在微孔板上形成免疫反应复合物T4类似物-T4抗体-HRP,通过酶促化学发光反应,就可以显示出与样品FT4浓度负相关的相对光单位(relative light unit,RLU),建立FT4化学发光检测方法.[结果]抗体经酶联免疫吸附实验证明对T4具有高度特异性,与3-iodo-L-tyrosine、3,5-diiodo-L-tyrosine、L-T3、D-T3、rT3无交叉反应.该方法建立的试剂盒标准曲线的线性相关系数不小于0.9900;分析灵敏度为0.9 pmol/L;线性检测范围0.9～130 pmol/L;精密度测试批内变异系数CV＜ 10％;与进口发光免疫分析系统做线性相关比较,线性回归系数为1.0852,相关系数为0.9673,临床符合率良好；本方法建立的试剂盒经加速稳定性试验37℃放置7d与2～8℃放置7d无异.[结论]综上所述,应用FITC系统建立的非均衡竞争FT4化学发光免疫分析灵敏度高、特异性好适于临床诊断应用.
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