论文部分内容阅读
【摘 要】目的：探讨他汀类药物对糖尿病大鼠微血管NF-κB表达是否存在器官特异性。方法：雄性SD大鼠60只，随机抽40只造模，余20只为正常对照（NC组）。成模大鼠随机分成两组，糖尿病非药物干预组（DM组）及阿托伐他汀干预组（DA组）。6个月处死大鼠，RT-PCR法扩增NF-κB基因，比较3组NF-κBmRNA表达差异。免疫组织化学法观察NF-κB蛋白表达差异。结果：PCR结果示DM大鼠视网膜、肾脏、心肌组织NF-κBmRNA表达均较NC组明显增高（P<0.05），DA组大鼠，NF-κB的mRNA表达比DM组明显减少（P<0.05）。免疫组织化学： NF-κB在NC心肌细胞中呈弱表达，在DM组心肌细胞表达显著增加（ P< 0. 01） ，DA组表达较DM组下降（ P< 0.01）。NC组视网膜上，在视网膜血管层有少许表达，DM组较NC组表达增加。DA组表达较DM组减少。NC组NF-κB多在肾小球表达，DM组与NC组相比，NF-κB阳性细胞数量在肾小球表达增加。DA组阳性细胞数较DM组减少。结论：阿托伐他汀能降低糖尿病大鼠微血管中NF-κB mRNA及NF-κB蛋白质表达，无器官特异性。
【关键词】阿托伐他汀；糖尿病视网膜病变；肾脏；心肌；NF-κB
【中图分类号】R587 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）04-0054-02
糖尿病是严重影响人类健康的内分泌疾病，糖尿病肾病（DN）、糖尿病心肌病（DC）及糖尿病视网膜病变（DR）为糖尿病微血管并发症。NF-κB作为一个有多向性调节作用的核转录因子，对众多调节血管病变的细胞因子、黏附因子等均有调控作用 [1]。研究发现，NF-κB在糖尿病微血管病变发生、发展中起着重要作用[2，3]。
他汀类药物除降血脂作用，具有抗炎作用[4]。阿托伐他汀对糖尿病大鼠视网膜、肾脏、心肌组织NF-κB表达均有作用，是否存在器官特异性，尚不清楚。本研究目的在于探讨阿托伐他汀对糖尿病微血管NF-κB表达是否存在器官特异性。
一、材料与方法
1 主要实验材料
1.1 实验动物及模型复制 ：健康8周龄雄性SD大鼠60只，体重200-350克。随机抽取20只做正常对照组（NC组），余大鼠以链脲左菌素65 mg/Kg[5]剂量一次腹腔注射。注射后72小时，常规消毒后，取尾静脉血少量，测量血糖，血糖高于16.7mmol/l[6]为糖尿病模型成功。成模的38只大鼠随机分两组，即糖尿病非药物干预组（DM组）及糖尿病阿托伐他汀干预组（DA组）。DA组于成模后48小时 ，将阿托伐他汀溶于饮用水，按每只大鼠体重2mg/kg/d灌胃，DM组及DC组每天予等量饮用水灌胃，共计24周。6个月药物治疗后，将三组大鼠各取8只，取大鼠双眼、肾脏及心脏，一部分用10%福尔马林固定制备病理切片，另一部分置于-80℃冰箱用于RNA提取。
2 方法
2.1 RT-PCR检测 NF-κB mRNA的表达
2.2 免疫组化方法检测 NF-κB表达：SABC法测定，DAB显色。检测方法严格按照说明书操作。显微镜下控制显色，阳性表达信号为棕黄色。PBS代替一抗做阴性对照。每个标本随机选取3张切片，每张切片随机选取3个200倍高倍视野，计算标本阳性细胞核数量均值为结果。
3 结果
3.3 免疫组化结果
4 讨论
NF-κB是一种以诱导形式广泛存在的蛋白质，以静息状态存在。激活后调控细胞功能。NF-κB由于对众多调节血管病变的细胞因子、粘附分子等均有调控作用，而被视为DM微血管病变的中心调节因子[7]。
近年发现，他汀类药物除降血脂外，具有抗炎作用。目前已经认识到慢性炎症在动脉粥样硬化中发挥重要作用[8]。
糖尿病大鼠视网膜、肾脏及心肌组织中，NF-κB被激活，DM组及DA组NF-κB mRNA表达均高于NC组，阿托伐他汀干预的DA组NF-κB mRNA表达低于DM组。说明阿托伐他汀能够抑制糖尿病大鼠微血管病变靶器官组织的NF-κB表达。
本研究证实阿托伐他汀可以抑制NF-κB在微血管病变部位表达，推测其可能减轻糖尿病微血管病变靶器官的炎症反应。未发现阿托伐他汀对微血管病变部位NF-κB的影响存在器官特异性。由于没有设置不同的阿托伐他汀剂量组，尚不能证实哪种剂量更安全有效，这有待进一步研究。
参考文献：
[1] 张海燕.核转录因子-kB及其相关因子与糖尿病血管并发症[J].国外医学 内科学分册，2004，31（2）；54-72.
[2] Jousen AM，Poulaki V，Mitsiades N，Kirchhof B，koizumi KK，Dohmen S，Adamis -AP . Nonsteroidal anti-inflammatory drugs prevent early diabetic retinopathy via-TNF-alphsuppression.[J].FASEB16；438-440，2002.
[3] Zheng L，Szabo C，Kern TS.Poly（ADP-ribose） polymerase is involved in the development of diabetic reptinopathy via regulation of nuclear factor-KB[J] .Dia -betes 53： 2960-2967，2004.
[4] Song Y ，L i C ，et a1 .Fluvastatin prevents nephropathy likely thorugh suppression ofConnective tissue growth factor-mediated extracellular matrix accumulation.Exp Mol Pathol.2004 Feb；76（1）：66-75.
[5] Wei M，Ong L，Smith MT，et al.The streptozotocin-diabetic rat as a model Of the chronic complication of human diabetes.Heart，Lung and Circulation.2003，12（1）：44-50.
[6] 汪新蝤主編 医学实验动物学 人民军已出版社 2000年：275-278.
[7] Marumo T，Schini-Kerth VB，Busse R. Vascular endothelial growth factor sctivates nuclear factor- KB and induces monocyte chemoattratant Protein-1 in Bovine Retinal Endothelial Cells[J].Diabetes，1999，48（5）：1131-1137.
[8] Ridker PM ，Rifai N ，Rose I，Buring JE，and Cook NR. Comparison of C-reactive protein and low-destiny lipoprot ein cholesterol levels in the prediction of first cardiovascularevents.N.Engl.J.Med，2002，347，1557-1565.
作者简介：
大连大学附属中山医院内分泌科（于晓静、王晓梅、隋淼、于扬、杨晓辉、李双）；病理科（朱瑞萍）；医保科（冯建军）
【关键词】阿托伐他汀；糖尿病视网膜病变；肾脏；心肌；NF-κB
【中图分类号】R587 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）04-0054-02
糖尿病是严重影响人类健康的内分泌疾病，糖尿病肾病（DN）、糖尿病心肌病（DC）及糖尿病视网膜病变（DR）为糖尿病微血管并发症。NF-κB作为一个有多向性调节作用的核转录因子，对众多调节血管病变的细胞因子、黏附因子等均有调控作用 [1]。研究发现，NF-κB在糖尿病微血管病变发生、发展中起着重要作用[2，3]。
他汀类药物除降血脂作用，具有抗炎作用[4]。阿托伐他汀对糖尿病大鼠视网膜、肾脏、心肌组织NF-κB表达均有作用，是否存在器官特异性，尚不清楚。本研究目的在于探讨阿托伐他汀对糖尿病微血管NF-κB表达是否存在器官特异性。
一、材料与方法
1 主要实验材料
1.1 实验动物及模型复制 ：健康8周龄雄性SD大鼠60只，体重200-350克。随机抽取20只做正常对照组（NC组），余大鼠以链脲左菌素65 mg/Kg[5]剂量一次腹腔注射。注射后72小时，常规消毒后，取尾静脉血少量，测量血糖，血糖高于16.7mmol/l[6]为糖尿病模型成功。成模的38只大鼠随机分两组，即糖尿病非药物干预组（DM组）及糖尿病阿托伐他汀干预组（DA组）。DA组于成模后48小时 ，将阿托伐他汀溶于饮用水，按每只大鼠体重2mg/kg/d灌胃，DM组及DC组每天予等量饮用水灌胃，共计24周。6个月药物治疗后，将三组大鼠各取8只，取大鼠双眼、肾脏及心脏，一部分用10%福尔马林固定制备病理切片，另一部分置于-80℃冰箱用于RNA提取。
2 方法
2.1 RT-PCR检测 NF-κB mRNA的表达
2.2 免疫组化方法检测 NF-κB表达：SABC法测定，DAB显色。检测方法严格按照说明书操作。显微镜下控制显色，阳性表达信号为棕黄色。PBS代替一抗做阴性对照。每个标本随机选取3张切片，每张切片随机选取3个200倍高倍视野，计算标本阳性细胞核数量均值为结果。
3 结果
3.3 免疫组化结果
4 讨论
NF-κB是一种以诱导形式广泛存在的蛋白质，以静息状态存在。激活后调控细胞功能。NF-κB由于对众多调节血管病变的细胞因子、粘附分子等均有调控作用，而被视为DM微血管病变的中心调节因子[7]。
近年发现，他汀类药物除降血脂外，具有抗炎作用。目前已经认识到慢性炎症在动脉粥样硬化中发挥重要作用[8]。
糖尿病大鼠视网膜、肾脏及心肌组织中，NF-κB被激活，DM组及DA组NF-κB mRNA表达均高于NC组，阿托伐他汀干预的DA组NF-κB mRNA表达低于DM组。说明阿托伐他汀能够抑制糖尿病大鼠微血管病变靶器官组织的NF-κB表达。
本研究证实阿托伐他汀可以抑制NF-κB在微血管病变部位表达，推测其可能减轻糖尿病微血管病变靶器官的炎症反应。未发现阿托伐他汀对微血管病变部位NF-κB的影响存在器官特异性。由于没有设置不同的阿托伐他汀剂量组，尚不能证实哪种剂量更安全有效，这有待进一步研究。
参考文献：
[1] 张海燕.核转录因子-kB及其相关因子与糖尿病血管并发症[J].国外医学 内科学分册，2004，31（2）；54-72.
[2] Jousen AM，Poulaki V，Mitsiades N，Kirchhof B，koizumi KK，Dohmen S，Adamis -AP . Nonsteroidal anti-inflammatory drugs prevent early diabetic retinopathy via-TNF-alphsuppression.[J].FASEB16；438-440，2002.
[3] Zheng L，Szabo C，Kern TS.Poly（ADP-ribose） polymerase is involved in the development of diabetic reptinopathy via regulation of nuclear factor-KB[J] .Dia -betes 53： 2960-2967，2004.
[4] Song Y ，L i C ，et a1 .Fluvastatin prevents nephropathy likely thorugh suppression ofConnective tissue growth factor-mediated extracellular matrix accumulation.Exp Mol Pathol.2004 Feb；76（1）：66-75.
[5] Wei M，Ong L，Smith MT，et al.The streptozotocin-diabetic rat as a model Of the chronic complication of human diabetes.Heart，Lung and Circulation.2003，12（1）：44-50.
[6] 汪新蝤主編 医学实验动物学 人民军已出版社 2000年：275-278.
[7] Marumo T，Schini-Kerth VB，Busse R. Vascular endothelial growth factor sctivates nuclear factor- KB and induces monocyte chemoattratant Protein-1 in Bovine Retinal Endothelial Cells[J].Diabetes，1999，48（5）：1131-1137.
[8] Ridker PM ，Rifai N ，Rose I，Buring JE，and Cook NR. Comparison of C-reactive protein and low-destiny lipoprot ein cholesterol levels in the prediction of first cardiovascularevents.N.Engl.J.Med，2002，347，1557-1565.
作者简介：
大连大学附属中山医院内分泌科（于晓静、王晓梅、隋淼、于扬、杨晓辉、李双）；病理科（朱瑞萍）；医保科（冯建军）