【摘 要】
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目的 基于Gateway技术构建人转化生长因子诱导蛋白(human Transforming Growth Factor-induced protein,hTGFBI)高表达的人间皮瘤细胞株H2596,为后续间皮瘤增敏研究提供基础.
【机 构】
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四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院,成都610041
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目的 基于Gateway技术构建人转化生长因子诱导蛋白(human Transforming Growth Factor-induced protein,hTGFBI)高表达的人间皮瘤细胞株H2596,为后续间皮瘤增敏研究提供基础.方法 商业购买hTGFBI全长基因原核细胞质粒,采用常规分子克隆技术及Gateway技术构建其慢病毒表达载体pDEST-h TGFBI并测序鉴定;pDEST-hTGFBI转染293T细胞进行慢病毒包装后感染人间皮瘤H2596细胞株;采用RT-qPCR和Western Blot分别从mRNA水平及蛋白质水平检测感染前后hTGFBI在H2596细胞株中的表达情况.结果 测序结果证实成功构建慢病毒表达载体pDEST-h TGFBI;RT-qPCR及Western Blot结果提示转染后,H2596细胞株中hTGFBI mRNA及蛋白质平均表达水平分别为对照组的9.98和19.2倍,显著升高(P＜ 0.05).结论 成功构建hTGFBI慢病毒表达载体pDEST-h TGFBI,并且hTGFBI在人间皮瘤H2596细胞株中呈高表达.
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