【摘 要】
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目的探讨转录因子活化蛋白-2α(AP-2α)对香烟提取物(CSE)所致半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)的活化及人脐静脉内皮细胞株ECV304凋亡的影响方法按照不同浓度CSE将ECV304细胞分为0.0%、2.5%、5.0%、10.0%、15.0%、20.O%CSE组;再将5.0%CSE组按照不同处理时间分为0、6、12、18、24、36和48 h组,按照不同转染腺病毒载体(Ad)分
【机 构】
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郑州市第一人民医院呼吸科,中南大学湘雅二医院呼吸科,长沙,410011
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目的探讨转录因子活化蛋白-2α(AP-2α)对香烟提取物(CSE)所致半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)的活化及人脐静脉内皮细胞株ECV304凋亡的影响
方法按照不同浓度CSE将ECV304细胞分为0.0%、2.5%、5.0%、10.0%、15.0%、20.O%CSE组;再将5.0%CSE组按照不同处理时间分为0、6、12、18、24、36和48 h组,按照不同转染腺病毒载体(Ad)分为Ad-AP-2α组、对照腺病毒载体(Ad-BgⅡ)组和对照组,按照不同转染基因及处理因素分为Ad-AP-2α+5%CSE 24 h组、Ad-BgⅡ+5%CSE 24 h组及对照+5%CSE 24 h组.每组3例.采用腺病毒介导的转染、双苯甲亚胺染核和Western blot等方法观察过表达AP-2α对CSE诱导的ECV304凋亡和Caspase 3活化的影响.采用Bartlett法进行方差齐性检验,两组间比较用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多个样本均数的多重比较采用LSD-t检验,多个样本率的比较采用X~2检验
结果2.5%CSE组的细胞增殖能力(吸光度值为0.754±0.109)明显高于对照组(吸光度值为0.630±0.086),其余浓度组的细胞增殖能力逐渐下降,并呈浓度依赖的方式.随着5.0%CSE作用时间延长,细胞凋亡率从(5.0±1.0)%逐渐增到(72.6±12.1)%;转染24 h时,AP-2α的蛋白相对含量的积分吸光度值(0.882±0.014)明显高于对照组(0.635±0.005);过表达AP-2α使5.0%CSE诱导的细胞凋亡率从(7.5±0.9)%降至(0.9±0.4)%,Caspase 3蛋白相对含量从0.484±0.025降至0.300±0.020
结论AP-2α可以抑制ECV304细胞中CSE诱导的Caspase 3活化及细胞凋亡.
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