表没食子儿茶素没食子酸酯对视网膜色素上皮细胞增殖及相关因子表达的影响

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目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖及相关因子表达的影响。方法体外培养人RPE细胞,设阴性对照组,40 mg·L-1、80 mg·L-1、160mg·L-1 EGCG 3个浓度药物处理组。利用MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR检测细胞周期素依赖性激酶抑制因子P21和P27 mRNA的表达,Western blot检测色素上皮衍生因子受体(pigment epithelium derived factor receptor,PDGFR-α)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和IκB蛋白的表达情况。结果 MTT实验结果显示,40 mg·L-1、80 mg·L-1、160 mg·L-1 EGCG药物处理组随着作用时间的延长,对人RPE细胞的增殖抑制作用也逐渐增强;随着药物浓度的增加,EGCG的增殖抑制作用也增强(均为P<0.05)。160 mg·L-1的EGCG在72 h的细胞增殖抑制率达到81.11%。随着EGCG浓度的增加,培养的人RPE细胞中G1期和G2期细胞比例减少,S期细胞比例增加,80 mg·L-1、160 mg·L-1EGCG药物处理组S期细胞比例与阴性对照组相比增加极显著(均为P<0.05)。EGCG对细胞周期的影响作用具有明显的剂量依赖性。与阴性对照组相比,80 mg·L-1、160 mg·L-1EGCG药物处理组细胞内的P21和P27 mRNA表达均有不同程度的升高(均为P<0.05);40 mg·L-1 EGCG药物处理组与阴性对照组相比,P27 mRNA表达也增高(P=0.015),而P21 mRNA表达增高不明显(P=0.824)。P21和P27 mRNA表达量与EGCG浓度呈明显量效依赖关系(均为P<0.05)。Western blot结果显示,40 mg·L-1、80mg·L-1、160 mg·L-1 EGCG作用人RPE细胞后,NF-κB蛋白表达随着浓度的增加而减少,各药物处理组与阴性对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。80 mg·L-1、160 mg·L-1 EGCG亦能够抑制人RPE细胞IκB蛋白和PDGFR-α蛋白表达,与相应阴性对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。EGCG对人RPE细胞内PDGFR-α、NF-κB和IκB的蛋白表达抑制作用呈明显的浓度依赖性(均为P<0.05)。结论 EGCG可以有效地抑制人RPE细胞的增殖,其机制可能与EGCG将人RPE细胞阻滞于S期,上调P21及P27 mRNA表达,下调PDGFR-α、NF-κB和IκB蛋白表达有关。
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