骨肉瘤细胞中CSF-1促进肿瘤血管的生成

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目的 :探讨骨肉瘤细胞中巨噬细胞集落刺激因子1(macrophage colony-stimulating factor-1,CSF-1)的表达对肿瘤血管生成的影响及其可能的机制。方法 :采用蛋白质印迹法检测人成骨细胞hF OB 1.19和骨肉瘤SAOS-2、MG-63、U2OS细胞中CSF-1及同种异体移植炎性因子1(allograft in ammatory factor-1,AIF-1)的表达。将siRNA-CSF-1或其阴性对照(siRNA-NC)转染骨肉瘤SAOS-2细胞后,应用蛋白质印迹法检测各组细胞中AIF-1和Ras相关的C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate-1,Rac-1)的表达。收集siRNA-CSF-1或siRNA-NC转染组SAOS-2细胞的培养上清液,以未转染的SAOS-2细胞作为空白对照(blank control,BC)组,分别与完全培养液以1︰1的体积比混合,制成条件培养液,培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)。分别应用MTT法、Transwell小室法和小管形成实验检测HUVECs增殖、迁移和小管形成情况,应用蛋白质印迹法检测HUVECs中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和Rac-1蛋白的表达。分别用siRNA-CSF-1条件培养液、siRNA-CSF-1条件培养液+DMSO(终体积分数为0.1%)和siRNA-CSF-1条件培养液+Rac-1激活剂佛波酯(phorbol12-myristate 13-acetate,PMA)处理HUVECs 24 h后,分别应用MTT法、Transwell小室法和小管形成实验检测细胞增殖、细胞迁移和小管形成情况,应用蛋白质印迹检测HUVECs中VEGF和Rac-1蛋白的表达。结果 :骨肉瘤SAOS-2、MG-63和U2OS细胞中CSF-1及AIF-1蛋白的表达水平均显著高于人成骨细胞hFOB 1.19(P值均<0.05),且二者呈正相关(R~2=0.492 2,P=0.001 2)。siRNA-CSF-1转染组骨肉瘤SAOS-2细胞中AIF-1和Rac-1的表达水平均下调(P值均<0.05)。骨肉瘤SAOS-2细胞条件培养液处理HUVECs后,siRNA-CSF-1组HUVECs增殖、迁移以及小管形成能力均显著降低(P值均<0.05),VEGF和Rac-1的表达水平均下调(P值均<0.05)。Rac-1激活后,siRNA-CSF-1条件培养液对HUVECs增殖、迁移、小管形成以及VEGF和Rac-1蛋白表达的作用均被反转(P值均<0.05)。结论 :骨肉瘤细胞中CSF-1可能通过AIF-1/Rac-1通路促进肿瘤血管的生成。
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