【摘 要】
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目的:利用慢病毒载体在可感染丙型肝炎病毒(hepatitisC virus,HCV)的Huh7.5.1细胞中过表达人肝细胞乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)受体钠离子牛磺胆酸共转运蛋白(sodiu
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院感染病科,江苏 南京,210029
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目的:利用慢病毒载体在可感染丙型肝炎病毒(hepatitisC virus,HCV)的Huh7.5.1细胞中过表达人肝细胞乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)受体钠离子牛磺胆酸共转运蛋白(sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)编码基因,建立Huh7.5.1-hNTCP细胞模型,使其可以被HBV、HCV共同感染.方法:使用携带人NTCP编码基因、绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)基因、嘌呤霉素抗性基因的GV358重组慢病毒载体,以感染复数(MOI)50感染Huh7.5.1细胞.经过嘌呤霉素筛选获得稳定表达人NTCP基因的Huh7.5.I-hNTCP细胞株,并通过Western blot验证NTCP蛋白的表达.使用HepAD38细胞来源的HBV感染Huh7.5.1-hNTCP细胞,通过ELISA及qPCR等方法检测HBV感染后不同时间点乙肝病毒表面抗原(HB-sAg)、e抗原(HBeAg)的表达以及HBV DNA的复制.HBV感染后24 h予以HCV-JFH1感染,检测合并感染状态下HBV DNA以及HCV RNA的复制.结果:Western blot结果表明Huh7.5.1-hNTCP细胞株可稳定表达HBV受体NTCP.HBV感染Huh7.5.1-hNTCP细胞后ELISA、qPCR结果显示,HBsAg、HBeAg、HBV DNA合成逐渐增加,并在第9天达峰.HBV/HCV合并感染Huh7.5.1-hNTCP细胞后,qPCR检测结果显示不同时间点HBV DNA、HCV RNA复制逐渐增加.结论:建立了Huh7.5.1-hNTCP细胞模型,该模型可被HBV/HCV合并感染.
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